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时间:2019-02-17
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1、一、研究背景果蝇(Drossphila)是遗传学试验中最常用的多年生物之一。属昆虫纲,双翅目,果蝇科,果蝇属。果蝇的染色体数目少(仅四对),具有许多自然的或诱发的可遗传突变性状,世代周期短(25℃下10~12天一代,个体小易于饲养,培养费用低廉,繁殖能力强,后代数目繁多,故被作为遗传学实验的典型模式生物。后续实验要作果蝇的杂交实验,需要大量的果蝇,本次实验可以学会识别果蝇的各种形状、区分果蝇的性别以及基本的饲养方法,为后续的实验打下基础。黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster),果蝇科(Drosophilidae)果蝇属(Drosophila)昆虫。因其生活史短
2、(在25℃左右温度下十天左右繁殖一代),繁殖力强(雌性可一次产下400个0.5毫米大小的卵),相对性状明显且可遗传,易于培养,培养成本低(酵母和细菌,腐烂水果),符合上述遗传学实验研究要求,同时因其染色体仅4对,基因组仅约165Mb,并且基因组超过60%的片段同人类疾病基因相似。故已将其作为一种常见的模式生物(modelorganism)大量使用在遗传学(genetics)和发育生物学(developmentalbiology)的研究。二、实验目的1、了解果蝇生活史,观察各发育阶段的形态特征2、掌握麻醉瓶的使用,即果蝇麻醉技术3、学会用肉眼(或解剖镜、显微镜)识别果蝇的性别,以
3、及几种果蝇的特征(大小、形态、条纹、性梳和外生殖器等);4、了解实验室饲养果蝇的常识方法和所用器械5、熟练观察果蝇几种突变性状,为果蝇杂交系列实验做准备。三、实验器材解剖镜、蓝色塑料板(10cm*10cm)一张、小毛笔、解剖针、麻醉瓶、培养皿、实验室饲养的黑腹果蝇野生型及其突变体(在果蝇瓶,即指管内)、镊子、酒精灯四、实验试剂乙醚、70%乙醇水溶液(含脱脂棉)五、实验步骤1、麻醉果蝇观察果蝇要先把果蝇麻醉,使之处于昏迷状态,便于观察。具体步骤如下:(1)麻醉瓶灭菌用70%的酒精擦拭麻醉瓶内壁,用镊子夹着在酒精灯上方烤干,注意镊子应与麻醉瓶口大约成45°角,以免酒精高温产生的火舌
4、产生伤害事件。原因:做果蝇杂交实验时,转移、分拣果蝇需要无菌处理,否则将影响果蝇瓶中酵母的生长,因而本次实验要求对其麻醉时需要灭菌。(2)3/3果蝇麻醉将麻醉瓶冷却,用手背轻碰,直至不烫为止。拿出培养瓶,轻拍使果蝇震落到培养基上。拔掉培养瓶的塞子,迅速将培养瓶口倒扣在麻醉瓶口上。向培养瓶瓶塞中的棉团滴2至3滴乙醚,再次轻拍培养瓶,使果蝇掉入麻醉瓶内,当有足够数量的果蝇落入麻醉瓶内时,重新盖上塞子。部分果蝇向上爬,爬得越高摔得越狠,因为离乙醚最近,便会被麻醉,片刻,果蝇纷纷掉落瓶底。原因:果蝇被麻醉了2、果蝇的观察将麻醉的果蝇置于解剖镜下,用小毛笔(最好不用解剖针)轻轻的拨动观察
5、,使其处于解剖镜下最合适的姿势原因:果蝇很脆弱,解剖针会损害其身体结构(1)雌雄果蝇的辨别①大小雌果蝇通常比雄果蝇大②形态雌体腹部稍尖,较宽厚呈卵圆形;雄体腹部钝圆,相对窄小呈柱状。③条纹雌体腹部背面有宽窄相近的5条黑色条纹;雄体腹背只有3条,上部条窄,最后1条宽且延伸至腹部腹面,呈一明显黑斑。④性梳果蝇胸足跗节共有5个亚节。雄体第一对胸足跗节的第一亚节基部有一梳状黑色鬃毛结构,称谓“性梳”。雌体没有性梳。⑤生殖器雄体外生殖器色深,雌体色浅。(2)果蝇的观察品系及表型特征18号野生型体色为灰色,红色椭圆形复眼,翅较长呈圆卵形,超过腹部约为体长两倍,翅脉细黑,刚毛细直、稀疏,平衡
6、棒末端稍膨大W号白眼体色为黄色,白色、椭圆形复眼,翅较长,超过腹部,翅脉细黑,刚毛细直、稀疏,平衡棒末端稍膨大14号黑檀体、残翅体色明显呈现黑色,红色椭圆形复眼,翅短蜷缩,平衡棒末端膨大,呈黑色6号白眼、小翅、卷刚毛蝇体体色较浅,胸部背面稍黄,白色、椭圆形复眼,翅大致与腹部等长,翅脉黑色、分支较多,刚毛粗短、柔软、卷曲,平衡棒末端膨大棒眼果蝇棒眼暗红色、棒状复眼,体色较黄,翅不长且翅脉细黑,刚毛稍短,平衡棒末端膨大黑体果蝇黑体体色呈现墨黑色,黑色椭圆形复眼,只有腿显出黄色,平衡棒末端膨大,呈黑色黄体果蝇黄体体色为亮黄色,红色椭圆形复眼,翅较长,超过腹部,翅脉也为黄色匙形翅果蝇匙
7、形翅体色为灰黄色,红色椭圆状复眼,翅较短,约为腹部一半的长度,呈现药匙形,刚毛直,平衡棒较小缺刻翅果蝇缺刻翅缺刻翅果蝇都为雌性果蝇,其特征为圆卵形翅出现不平整凹陷,其他特征与野生型相似,因为未发现雄性缺刻翅,因而判断缺刻翅为伴X隐性基因,具有纯合致死及雄性致死的特点此外,我们还用高倍镜观察了性梳(11个齿儿),观察了蛆(晶莹透亮,但分不清头尾)二、附:(一)注意事项1、配制培养基时要将(玉米粉)及(琼脂和绵白糖)分开煮。2、转移果蝇时要防止果蝇飞走。3、麻醉果蝇时要掌握麻醉尺度,需要用活体时
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