广东省规模化猪场猪圆环病毒感染情况及分子特征研究

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1、河南农业大学硕士学位论文广东省规模化猪场猪圆环病毒感染情况及分子特征研究姓名：梁鹏帅申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：宋长绪；张龙现201206河南农业大学2012届硕士学位论文摘要猪圆环病毒分为猪圆环病毒1型(PCVl)和猪圆环病毒2型(PCV2)两种类型，近年来的研究发现PCV2与一系列猪的综合征有关。PCV2由于引起PCVAD而受到广泛关注，而PCVI在猪群中的感染情况近年来很少有人研究。为了解广东省猪圆环病毒的最新流行情况和广东省病猪群PCV2的感染情况及其与PRRSV的相关性，本研究采集了广东省

2、11个规模猪场各饲养阶段猪血清807份，用套式PCR(nPCR)检测PCVI利PCV2：采集了若干猪场2010年1月至2012年2月间有咳嗽，喘气，消瘦及疑似PDNS等临床症状的猪血清312份和来自实验室猪病门诊疑似PCVAD的病猪血清样品343份(以下称病猪)，以及无临床症状猪血清104份(以下称健康猪)，以nPCR检测PCV2，以一步法反转录PCR(RT-PCR)检测猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)。结果发现所调查的11个规模猪场中只有5个检山PCVI，所有猪场均检山PCV2。PCV2阳性率为30．61％，

3、而PCVI刚性率仅为4．21％；经产母猪和7周龄以上保育猪PCV阳性率最高；病猪血清PCV2刚性率为59．1％，PRRSV阳性率为43．8％，PCV2阳性猪群中有41．6％的猪同时感染PRRSV；病猪群1肚12月的PCV2感染率最高，而1～3月最低；健康猪血清PCV2阡l性率为37．5％，PRRSV圈l性率为3．29％，PCV2与PRRSV无混合感染。证明PCV尤其是PCV2在华南地区仍广泛传播井流行，而且PCV2与PRRSV混合感染致病情况较多。PCV2的感染率与季节有一定的相关性，种猪带毒情况严重。为了解疫苗免

4、疫与否对猪只抗体水平的影响，初步评估疫苗免疫的效果及保护力，了解免疫后PCV2抗体的消长规律及免疫压力下PCV2的变异情况，本研究按生长阶段不同采集免疫PCV2疫苗猪场(免疫场)和不免疫PCV2疫苗猪场(非免疫场)的猪全血样本798份进行PCV2抗体和抗原检测，对部分附I生样品扩增全基因序列进行序列分析。调查发现免疫场公猪PCV2抗体阳性率达到100％，经产母猪PCV2抗体

5、j

6、I性率达到98．5％，而非免疫场公猪抗体阳性率为75％，经产母猪抗体圈卜I生率达到91．3％，免疫场抗体阳性率高于非免疫场，说明进行PCV

7、2疫苗免疫可以提高猪场PCV2的抗体水平。病毒检测结果发现免疫场经产母猪PCV2刚性率仅为8．46％，而非免疫场经产母猪PCV2刚性率达到24．3％，说明疫苗免疫对降低PCV2的感染率有一定的效果。分别对比经产母猪，公猪和后备母猪的抗体和病毒感染情况发现二者并不相符，三者抗体圈{性率均远远高于病毒感染率，证明对经产母猪，公猪和后备母猪的PCV2抗体情况调查并不能说明PCV2的感染情况。仔猪PCV2抗体和病毒感染情况随着周龄的升高呈现出规律性的变化，其中抗体有两个高峰，即1～3周龄和6~lO周龄，病毒感染率在6周龄之

8、后呈升高趋势。免疫场仔猪PCV2感染率明显低于非免疫场的感染率，说明母猪免疫对仔猪有一定的保护作用。对免疫场和非免疫场PCV2全基因序列分析发现他们与法国(AF055393)和加拿大(DQ220730)的毒株序列相比具有较高的同源性，最高分别达到98．6％和98．5％，本研究分离到的毒株与国内毒株具有较近的亲缘关系，免疫猪场毒株序列有所变化。2河南农业大学2012届硕士学位论文现有PCR方法只能检测到PCV2的存在而不能区分基因亚型。传统分型方法须经测序和序列比对，过程繁琐，成本较高。本文根据PCV2a和PCV2b

9、的序列特点，设计合成了3条引物，建立起了区分PCV2a和PCV2b基因型的PCR方法。试验结果表明该方法敏感性、特异性较强，适合用于PCV2基因亚型的检测。同时，本研究利用该PCR方法对广东省多家规模化猪场的猪血清样本进行了检测，结果发现PCV2在广东省健康猪群中的感染率为31．5％，在病猪群中的感染率达到42．1％，其中PCV2b成为主要的基因型，PCV2a仅存在少量感染，存在同一头猪同时感染PCV2a和PCV2b的情况。说明PCV2b已经成为广东省的流行毒株。为了解广东地区PCV2的流行毒株及其变异情况，从20

10、10if----2012年广东省23份疑似PCVAD病猪血清中分离PCV2病毒，用PCR和间接免疫荧光方法对这些毒株进行检测，并以PCR方法扩增得到其全基因序列进行序列分析。结果发现分离得到了23株PCV2流行毒株，其中有2株1766bp的毒株，其他均为1767bp的毒株。这些毒株与GenBank中其他PCV2全基因序列的同源性在94．2％．99％之间，毒株