[药学]生物技术本科仪器分析学实验教案

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1、商洛学院生物医药工程系仪器分析实验教案适用专业：生物技术（本科）专业时间：2010年3月至2010年7月-44-实验一可见-紫外分光光度计检查一、实验目的1、了解紫外-可见分光光度法对溶剂的要求；2、熟悉可见-紫外分光光度计杂散光的检测方法；3、掌握可见-紫外分光光度计吸收度准确度的测定方法；4、掌握不同检测波长下分光光度计对光源和比色皿的要求。二、实验原理1、对溶剂的要求含有杂原子的有机溶剂通常均有具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。如：甲醇、乙醇的截止使用波长为205nm。另外，当溶剂不纯时，也可能增加干扰吸收。因此，在测定供试品前，

2、应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近是否符合要求。2、杂散光由于仪器元件表面对光的反射和散射，单色光中含有一定的杂散光。杂散光可影响摩尔吸收系数与吸光度间的直线关系。3、吸收度准确度检测朗伯比尔定律：A=lg1/T=ECLA：吸光度T：透过率E：吸收系数，表示方法为E1%1cm，其物理意义为溶液的浓度为1％（g/mL）液层厚度为1cm时的吸光度系数。C：溶液浓度（g/100mL）L：液层厚度三、实验仪器UV755B型可见-紫外分光光度计。-44-四、实验方法1、溶剂检查将溶剂置1cm石英吸收池中，以空气为空白，测定其吸光度。溶剂和吸收池的吸光度，在220-240nm范围内不得超

3、过0.40。在241-250nm范围内不得超过0.20，在251-300nm范围内不得超过0.10，在300nm以上时不得超过0.05。2、杂散光检查按表1-2所列试剂和浓度配制成水溶液，置1cm石英吸收池中，在规定的波长处测定透光率，应符合表1-2中规定。3、吸收度准确度检测取在120℃干燥至恒重的重铬酸钾（基准）约60mg，精密称重，用0.005mol/L硫酸溶液溶解并稀释至1000mL，在规定的波长处测定并计算其吸收系数应符合表1-3中规定。五、数据记录表1-1：溶剂检查结果记录波长/nm220-240241-250251-300>3002202302352412452502

4、60275300350500800吸光度标准<0.40<0.20<0.10<0.05吸光度测量表1-2：杂散光检查结果记录试剂浓度/%(g/mL)测定的波长/nm透光率（T）/%NaI1.00220<0.8实际测量值NaNO25.00340<0.8实际测量值-44-表1-3：吸收度准确度检测结果波长/nm235257313350吸收系数（E1%1cm）的规定值124.5144.048.6106.6吸收系数（E1%1cm）的许可范围123.0-126.0142.8-146.247.0-50.3105.5-108.5吸光度（A）吸收系数（E1%1cm）的测量值六、实验结果与分析1、本次

5、实验所用仪器各项检查结果是否符合要求？如不符合要求，请分析有哪些可能原因。2、请通过本次实验总结使用可见-紫外分光光度计时有哪些注意事项？-44-实验二校准曲线法检测柠檬酸三胺浓度一、实验目的1、了解检测物质最大吸收波长的意义；2、熟悉760CRT型紫外-可见分光光度计的基本操作；3、掌握校准曲线定量法。二、实验原理1、最大吸收波长以波长为横坐标，吸光度为纵坐标作图，就可以得到该在测量波长范围内的吸收曲线。这种曲线体现了物质对不同波长的光的吸收能力，称为吸收光谱。在光谱中有一最大吸收峰，该最大吸收峰对应的波长即为最大吸收波长。2、为何要测最大吸收波长（1）最大吸收波长因物质的分子结

6、构不同而不同，应此，其可作为物质定性分析的依据之一。（2）不同浓度的溶液的吸光度在最大吸收波长处的差值最大，所以以最大吸收波长作为检测波长可得到最大灵敏度；而且最大吸收波长处峰形相对平缓，可减少仪器波长精度不准带来的误差（当最强吸收峰形比较尖锐时，往往选用吸收稍低、峰形稍坦的次强峰或肩峰进行测定）3、校准曲线定量法校准曲线法又称标准曲线法。根据朗伯比尔定律，在吸收池厚度不变，其它条件相同的情况下，吸光度与浓度间具有线性关系，即：A=KC+B根据直线的特点，未知物质也应该符合此种关系。三、实验仪器760CRT型（双光束）可见-紫外分光光度计。四、实验方法-44-1、柠檬酸三胺溶液的配

7、制精密称取柠檬酸三胺标准品5g，置1000mL容量瓶内，用水溶解并稀释至刻度，摇匀即得。2、最大吸收波长的确定取上述柠檬酸三胺溶液适量，得用760CRT型分光光度计进行扫描（190nm-900nm），找出最大吸收峰，其对应的吸收波长即为最大吸收波长。3、绘制校准曲线以上述柠檬酸三胺溶液为标准储备液。分别精密吸取上述储备溶液1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，5.0mL于25mL容量瓶内，用水稀释至刻度，即得柠檬酸标准液。取上述柠檬酸三胺系列标准溶液分别测定