p2x7受体在脊髓缺血再灌注损伤中的作用研究

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1、第二军医大学博士学位论文P2X7受体在脊髓缺血再灌注损伤中的作用研究姓名：纪瑞华申请学位级别：博士专业：麻醉学指导教师：石学银；向正华201205P2X7受体在脊髓缺血再灌注损伤中的作用研究摘要脊髓缺血再灌注(ischemia—reperfusion，I／R)损伤是引起胸主动脉及脊柱手术后发生截瘫的最主要原因。由于治疗困难，致残率与致死率非常高。目前关于脊髓I／R损伤病理学的确切机制仍不清楚，有研究表明同一系列复杂的病理过程有关，包括：兴奋性中毒，氧自由基的生成，炎症和凋亡。因此，脊髓I／R损伤已经成为现代医学和

2、神经科学领域的难题和热点。尽管目前使用很多策略来增加脊髓对缺血的耐受性，减少其神经并发症，但是临床尚无治疗截瘫病人的特效药物，迫切需要找到一种有效的药物治疗方式。三磷酸腺苷(adenosinetriphosphate，ATP)作为第一信使参与信息传递，调节组织细胞的生化代谢与生理活动。更重要的是，组织损伤时有大量ATP释放，参与免疫和炎症反应。传导ATP信号的受体分为P2X和P2Y受体两类，其中P2X受体是配体门控的离子通道。P2X7受体是P2X受体第七个亚型，其独特的结构和功能特点倍受关注。高浓度ATP反复持续

3、的激活可以使P2X7受体形成一个大的质膜孔道，导致细胞死亡。有研究表明，拮抗P2X7受体可以减轻大脑中动脉闭塞引起的脑缺血再灌注损伤。P2X7受体在大鼠脊髓I／R损伤中的作用目前尚未见相关报道。目的1、建立稳定的大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型2、研究P2X7受体脊髓缺血再灌注损伤后在脊髓灰质的表达变化。3、研究拮抗P2X7受体后，是否可以减轻脊髓缺血再灌注损伤，并探讨相关机制。方法l、运用2F—Fogarty导管阻断大鼠降主动脉下段，结合全身低血压，来建立稳定的大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。假手术组，其他同手术组，但不

4、诱导脊髋缺血。2、脊髓缺血再灌注损伤后1d、3d、5d、7d，应用BBB评分评价大鼠运功功能的改变；取脊髓L4一L6行Nissl染色评价脊髓前角正常运动神经元的数量；运用双重标记的免疫荧光组织化学鉴定P2X7受体的表达；运用Western—blot检测术后不同时间点P2X7受体在蛋白水平上的变化。3、在大鼠缺血再灌注15min后，股静脉给予P2X7受体拮抗齐UBBG(50mg／kg)，术后第二军医大学博士学位论文第2d和3d连续给药，共给药3次；Saline组给予和BBG50组相同的剂量的生理盐水。观察术后4d、

5、14d、21d，大鼠的运动功能的改善情况，然后行Nissl染色，双重标记的免疫荧光组织化学，检测mRNA和蛋白水平上P2X7受体的变化。并初步探讨P2X7的激活是否和炎症信号途径MAPK有关。结果1、建立了大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型，实验中得出的模型成功复制的要点：雌性SD大鼠260—3009，肛温维持在35．9左右，术中大鼠的全身循环血压维持在46mmHg左右，股动脉血压维持在7n．1rnHg左右，缺血9min。2、脊髓缺血再灌注损伤后1d，3d，5d，7d后大鼠的运动功能明显障碍，同sham组比较，BBB评分

6、有显著的统计学意义(P<0．001)，但是实验组间大鼠运动功能评分无显著的统计学意义(P>O．05)。随着再灌注损伤时间的延长，大鼠的脊髓前角的正常运动神经元数量明显减少，和sham组比，有显著的统计学意义(P

7、am组比较，术后第3d，小胶质细胞开始出现大量明显的激活。脊髓缺血再灌注后，星形胶质细胞大量激活，1d有少量细胞发生形态学改变，但是不明显，到5d和7d时活化较为明显，并且星形胶质细胞只在损伤周围活化，损伤部位无星形胶质细胞。Western-blot结果显示：从再灌注损伤ld开始到7d，P2X7受体的蛋白水平逐渐增加，7d表达最多，同sham组和其他实验组相比(P

8、中第BBG50组第14d运动功能改善最为明显，同BBG504d比较有显著的统计学差异(P