j亚群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病试验

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1、山东农业大学硕士学位论文J亚群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病试验姓名：李传龙申请学位级别：硕士专业：预防兽医学指导教师：崔治中20120615山东农业大学硕：L学位论文中文摘要禽白血病病毒(AvianLeukosisVirus，ALV)是以引起禽各种造血细胞肿瘤性增生为特征的一类反转录病毒群，其中能感染鸡的可分为A、B、C、D、E和J6个亚型，临床上常见的为A、B和J亚型，而C、D亚型在临床上相对少见，E亚群主要以前病毒的形式存在于宿主基因组而广泛存在。ALV．J是1988年英国Campton动物保健协会首先分离得到的。近几年在我国已先后从商品肉鸡、蛋

2、鸡、麻鸡中发现ALV-J，最近从临床血管瘤病例中也分离到ALV．J。早在100年前，就已发现了鸡的急性肉瘤，后来证明是由与ALV-A或ALV-B相关的带有肿瘤基因的急性ALV引起，其细胞类型是一种纤维细胞瘤，但一直没有ALV．J相关的急性纤维肉瘤的报道。本研究从30多日龄817肉杂鸡颈部疑似纤维肉瘤中分离到一株ALV．J，该ALV作为辅助病毒能在较短时间诱发急性纤维肉瘤，对其致病性进行了研究。l攻毒用病料来源与病毒制备m由山东农业大学动物科技学院家禽肿瘤病研究室于2010年从山东某鸡场30多日龄’颈部皮下出现肉瘤的817肉杂鸡个体中采集到。本研究中，首先将在．8

3、0℃保存的肉瘤“组织与无菌生理盐水按l：5(质量体积比)研磨成悬液，然后以12000r／min，离心10rain．后，再用0．221．tm滤器过滤获无细胞滤液。病料过滤液直接接种实验鸡或接种于DFl细胞用于病毒分离或增殖。·2人工感染诱发的急性纤维肉瘤眼观病变·病毒引起的鸡产生的急性纤维肉瘤主要附着在攻毒部位皮下，将完整的大肿瘤切开后，可以看到许多大小不同且相互独立的次级纤维肉瘤结节。3病理组织学观察病理组织学观察，所有肉瘤都表现类似的病理组织学变化。在肉瘤组织不同的区域，表现不同的细胞类型，即使在同一切片中甚至同一视野的不同部位，也可能存在不同类型的细胞。有的

4、区域细胞主要呈椭圆形或梭形或不规则形，但大部分区域是呈细长的两端尖状的典型的纤维细胞。在肿瘤内，纤维细胞呈束状排列，细胞核形状不一，有圆形、长圆形、不规则形状，胞核大小不一。有的胞核似有分裂现象。4不同注射部位接种病料滤过液采用颈部皮下、胸肌、腹腔为接种部位，分别于1日龄以0．2ml／只的剂量将病料滤过液接种经棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的817肉杂鸡。结果显示：颈部J弧群禽白血病病毒相关的鸡急性纤维肉瘤人工造病实验皮下、胸肌、腹腔三个部位攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100％(20／20)、95．2％(20／21)、100％(20／20)。5不同品种鸡接

5、种病料滤过液试验选取棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的1日龄白羽肉鸡，海兰褐，SPF鸡，817肉杂鸡4个品种鸡，分别于1d以0．2ml／只的剂量采用腹腔接种新鲜肿瘤组织研磨。结果显示：白羽肉鸡、海兰褐、817肉杂鸡和SPF鸡急性纤维肉瘤率分别为78．3％、63．2％、85．0％、90．0％。6不同剂量病料滤过液接种实验以棉拭子P27抗原检测和血清抗体检测呈阴性的1日龄817肉杂鸡和SPF鸡为对象，首先将未经稀释的病料滤过液及其1：10、l：100、1：1000、l：10000和l：100000的稀释液以0．2ml／只的剂量颈部皮下接种817肉杂鸡和SPF

6、鸡。结果显示：病料过滤液病料滤过液直接接种817肉杂鸡和SPF鸡的肿瘤发生率均为100％(10／10)，10倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为80％(8／10)和100％(10／10)，100倍稀释后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为100％(10／10)和80％(8／10)，1000倍稀后攻毒鸡的肿瘤发生率分别为40％(4／10)和50％(5／10)，更高倍数稀释后攻毒鸡没有肿瘤发生。7细胞培养上清液接种鸡将病料滤过液接种DF．1细胞的上清液接种6只1日龄817肉杂鸡，每只颈部皮下接种0．2mL。结果显示：细胞培养上清造成33．3％(2／6)的817肉杂鸡发生肉瘤。关键词

7、：急性纤维肉瘤：人工造病；J亚群禽白血病病毒(ALV．J)山东农业大学硕士学位论文ABSTRACTAvianleukosisviruses(ALVs)areagroupofretroviruses，whicharedividedintosubgroupsAthroughJbasedontheantigencityofenvelopeproteingp85．ButonlysubgroupsA，B，C，D，EandJwereisolatedinChickens．CommonclinicalsubgroupsareA，BandJ，whilesubgroupsCandD

8、arerelativel