2010年河北省哨点监测医院5岁以下住院病例病毒性腹泻病原学研究

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1、河北医科大学硕士学位论文2010年河北省哨点监测医院5岁以下住院病例病毒性腹泻病原学研究姓名：李晓毅申请学位级别：硕士专业：病原生物学指导教师：齐顺祥201203中文摘要2010年河北省哨点监测医院5岁以下住院病例病毒性腹泻病原学研究·摘要世界范围内腹泻是婴幼儿发病和死亡的主要疾病之一，发病率仅次于呼吸系统疾病。全世界每年都有上百万的儿童死于与腹泻相关的疾病或是并发症，并由此给全球带来巨大的疾病负担。病毒是引起婴幼儿急性腹泻的主要病原之一，常见的有轮状病毒(HRV)、杯状病毒(HuCV)、腺病毒(E

2、AdV)$N星状病毒(AstV)。因此，长期系统的监测非常必要，对预防和控制病毒性腹泻有重大作用。目的：了解导致儿童腹泻的主要的四种病毒流行特点和规律，掌握儿童病毒性腹泻的流行强度和病原构成，为制订病毒性腹泻防治策略提供参考依据。方法：1采用哨点医院监测方法采集59月龄以下住院腹泻病例粪便标本。2用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测轮状病毒抗原和用Real—timePCR法对杯状病毒、星状病毒和肠道腺病毒进行核酸检测。3再采用反转录一聚合酶链反应(RT-PCR)方法对轮状病毒分型。4分别随机选择A组

3、G9型轮状病毒和诺如II型病毒各10株PCR产物进行基因序列测定，分析其序列特征并绘制进化树。5用SPSS软件包统计处理实验结果。结果：在414例标本中，有235例至少有一种病毒感染，阳性率为56．8％；混合感染为18例，阳性率为4．3％。按单一病原统计，轮状病毒阳性标本190例，感染率为45．9％；杯状病毒阳性标本52例，感染率为12．6％；腺病毒和星状病毒较少，阳性标本均为6例，感染率为1．4％。混合感染分别为两种或三种病毒感染，共18例。两种病毒感染中，HRV和HuCV混合感染最多64．3％(

4、9／14)，其次是HuCV和Ast为3例；三种病毒感染仅有1例，为HRV、SV和Adv感染。190例轮状病毒阳性者中，G血清分型结果为：G3型最多，99例(52．1％)；G9型37{歹JJ(19．5％)；G2型12例(6．3％)；G1型11例(5．8％)；G8型中文摘要1例(O．5％)；不同型混合感染18例(9．5％)，其中G3+G9型6例，GI+G9型5例，GI+G3型4例，G2+G9型、G8+G9型、G2+G3+G9型各1例；未分型12例(6．3％)。P基因型分型结果为：P[8】型最多，为100

5、例(52．6％)：P[6】型19例(10％)；P(41型5份(2．6％)；P[IO]型l例；不同型混合感染12例(6．3％)，其中P【6】+P[8】型7tN3．7％)；P[8I+P[IO]型2例(1．1％)；P[6】+P[IO]型、P[8]+P[9】型、P[4】+P[6】+P[10]型各1例；未能分型53例(27．9％)。G血清型和P基因型组合以G3P[8]型居多，为55例，占28．9％(55／190)：其次为G9P[8]型26例，占13．7％(26／190)；GI+G3P[8】+jP[9】为1例；

6、Gl+G9P[6]+P[81为1侈0；G8+G9P[6】+P[8】为1侈0。在杯状病毒阳性的52例中，诺如II型最多，为37例，占71．15％；其次为札如病毒，为11例；诺如I型最少，为4例。轮状病毒以12月检出率较高，11月、12．月和1月份为HRV腹泻的高峰期，主要感染18月龄以下儿童。杯状病毒、星状病毒、腺病毒未表现出明显的季节性。对lO例A组G9型轮状病毒阳性标本VP7编码基因进行了序列测定，与G1、G2、G3、G4、G9参考株序列进行比对并绘制进化树。10例标本的组内核苷酸同源性为98．9

7、0／o-100．O％，氨基酸同源性为99．2％～100．O％，且均与G9型参考株在同一分支上，核苷酸序列同源性亦较高，为97．6％～99．4％，与其他4个血清型G1、G2、G3、G4型的参考株同源性较低，为71．6％'--79．2％，说明10例感染的HRV毒株均为G9血清型。对10例诺如II型阳性标本衣壳蛋白区核苷酸序列进行了测定，与GIIl：GIl2、GIl3、GIl4、GIl5；GIl7、G11、G12、G14、G16参考株序列进行比对和分析并绘制进化树。5株标本(编号为LLl0070、LLl0

8、101、LLl0108、10131133、LLl0279)的组内核苷酸同源性为95．9％~99．7％，氨基酸同源性为96．0％100．O％，与GIl4型参考株在同一分支上，并且核苷酸序列同源性较高，为97．O％,-98．2％；另外5株标本(编号为LLl0100、LLl0141、LLl0166、LLl0187、LLl0189)的组内核苷酸同源性为95．6％---99．1％，氨基酸同源性为96．0％---100．o％，并且与GIl3型参考株在同一分支上，核苷酸序列同源性较