实验7-2酶学-影响酶促反应的因素

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1、实验7-2酶学-影响酶促反应的因素（-）温度对酶活力的影响【实验目的】了解温度对酶活力的影响素。【实验原理】温度对酶的活性有很大的影响。酶促反应开始时，反应速度随着温度的升高而加快，达到最大反应速度时的温度称为某种酶的最适温度。由于绝大多数酶是有活性的蛋白质，当达到最适温度后继续升高温度，可引起蛋白质变性，酶促反应速度下降，以致完全停止。低温能降低酶或抑制酶的活性，但不能使酶失活。酚的最适温度不是一个常数，它与作用时间长短有关。测定酚活性均在最适温度下进行。大多数动物酶的最适温度在37〜40“C范围，植物酶的最适温度在50〜60°C范围。【实验器材】（1）试管与试管架（

2、2）恒温水浴（3）冰浴（4）沸水浴（5）移液管（1、2mL）（6）烧杯（500、lOOOmL）（7）锥形瓶（100mL）（8）玻璃漏斗（9）滤纸等。【试剂与材料】（1）0.2%淀粉的0.3%氯化钠溶液（0.2g淀粉溶于lOOmLO.3%氯化钠溶液中煮沸2〜3分钟）。（2）稀释200倍的新鲜唾液。（3）碘化钾一碘溶液（将碘化钾20g溶于100mL水中，使用前稀释10倍）。【实验操作】淀粉和可溶性淀粉遇碘呈蓝色。糊精按其分子大小，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色或红色。最简单的糊精遇碘不呈颜色，麦芽糖遇碘也不呈颜色。在不同的温度下，淀粉被唾液淀粉酶水解的程度可rh水解混合物遇碘呈

3、现的颜色來判断。取3支试管，编号，按下表操作：管号1230.2%淀粉的0.3%氯化钠溶液5L）1.51.51.5稀释唾液（mL）11煮沸过的稀释唾液（mL）1摇匀后，将1号、3号两试管放入37"C恒温水浴中，2号试管放入冰浴中，10分钟后取岀，(将2号试管内的液体分成网半)用碘化钾一碘溶液來检验，2号试管的另一半继续在37“C恒温水浴中保温10分钟后，用碘化钾一碘溶液来检验。碘化钾一碘溶液(滴)111记录观察结果(二)pH对酶的活力的影响【实验目的】了解pH对酶的活力的影响【实验原理】酶活力受环境pH的影响，在一定pH下，酶表现最大活力，高于或低于此pH,酶活力降低，通

4、常把表现出酶最大活力的pH称为该酶的最适pH。pH影响酶活力的主要原因有以下几个方面，首先，pH影响酚分子活性部位上有关基团的解离，另外，也影响底物的解离状态，从而影响酶活性中心与底物的结合或催化。其次，有关基团解离状态的改变影响酶的空间构彖，甚至会使酶变性。尽管有一些酶能忍受较人的pH的变化，但大多数酶保持活性的pH值范围很窄。正因如此，生物体使用缓冲液调节体内的适宜pH值。木实验观察pH对唾液淀粉酶活性的影响，唾液淀粉酶最适pH为6.8。【实验器材】试管及试管架；滴管；恒温水浴锅；温度计；移液管；50mL的锥形瓶【实验试剂】(1)新配置的溶于0.3%氯化钠溶液的0.

5、5%淀粉(2)稀释200倍的新鲜唾液(3)0.2mol/L磷酸氢二钠溶液(4)0.1mol/L柠檬酸溶液(5)碘化钾一碘溶液(6)pH试纸【实验操作】1、取4个标有号码的50mL锥形瓶，按下表加入试剂：锥形瓶号0.2mol/L磷酸氢二钠(mL)0.1mol/L柠檬酸溶液(mL)pH15.154.855.026.053.955.837.722.286.849.720.288.0（2）取4支试管编号，按下表加入试剂试管号各锥形瓶内的缓冲液（mL）0.5%淀粉(mL)稀释200倍的新鲜唾液（mL）11号锥形瓶缓冲液32222号锥形瓶缓冲液32233号锥形瓶缓冲液32244号锥

6、形瓶缓冲液322注意：向各试管屮加入稀释唾液的时间间隔各为1分钟。（3）将各管的内容物混匀，并依次置于37°C恒温水浴中保温（4）待向第4管加入唾液2分钟后，每隔1分钟由第3管取出一滴混合液，置于白瓷板上，加1小滴碘化钾一碘溶液，检验淀粉的水解程度。待混合液变为棕黄色时，向说有试管依次添加1〜2滴碘化钾一碘溶液。添加碘化钾一碘溶液的时间间隔，从第1管起，亦为1分钟。观察各试管中物质呈现的颜色，分析pH对唾液淀粉酶活性的影响。（三）唾液淀粉酶的活化和抑制【实验口的】了解激活剂和抑制剂对酶活力的影响。【实验原理】酶的活性受活化剂或抑制剂的影响。氯离子为唾液淀粉酶的活化剂，铜

7、离子为其抑制剂。【实验器材】（1）恒温水浴（2）试管及试管架【试剂和材料】（1）0.1%淀粉溶液（2）稀释200倍的新鲜唾液管号12340.1%淀粉溶液（mL）1.51.51.51.5稀释唾液0.50.50.50.51%硫酸铜溶液0.5———1%氯化钠溶液—0.5——1%硫酸钠溶液——0.5—蒸谓水———0.537°C恒温水浴、保温10分钟碘化钾一碘溶液（滴）2~32~32~32〜3现象解释结果，说明木实验第3管的意义。（5）1%硫酸钠溶液【实验操作】（6）碘化钾一碘溶液思考题1、什么是酶的最适温度及其应用意义？2、什么是酶反应的最适pH