地衣芽孢杆菌fosmid文库构建及絮凝基因探索

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3、Fosmid文库，尝试对该株细菌絮凝基因进行探索。结果表明，B．1icheniformisCGMCC2876Fosmid文库构建成功，共获得1824个重组克隆，重组克隆可以稳定遗传，外源插入片段在25-40kb之间。应用两步建池策略，构建了超级池、初级池和二级池，以生物絮凝剂对高岭土悬浮液的絮凝作用为标准，快速筛选具有絮凝活性的阳性克隆。最终得到4株阳性克隆，定位于第17号板池(PoolB，Pool4)(PoolD，Pool5)(PoolD，Pool7)(PoolG，Pool10)。对其中的部分阳性克隆进行全长测序并进行序列分析。Softberry软件及BL

4、AST程序分析该插入片段约29kb，含有24个推测的开放阅读框。对推定基因编码的产物进行注释，基因编码的产物大部分为参与多糖类物质合成的酶或蛋白，包括磷酸转移酶、ABC转运蛋白、糖苷水解酶、半乳糖通透酶、甘露糖转移酶、糖基转移酶家族蛋白、UDP一葡萄糖．4．差向异构酶等催化生物反应的一系列酶。同时获得编码未知功能蛋白的基因。蛋白亚细胞定位预测13种产物为膜蛋白，3种蛋白定位于胞外，其他为细胞质基质蛋白质，预测该片段含13个启动子、13个终止子及5个操纵子。推测该片段的某些开放阅读框可能与合成地衣芽孢杆菌胞外多糖类絮凝剂有关。另外，分析插入片段的酶切位点，尝试

5、酶切缩小插入片段构建亚克隆。该结果为进一步研究地衣芽孢杆菌基因组结构功能及细菌絮凝基因奠定了基础。关键词：生物絮凝剂；地衣芽孢杆菌；Fosmid文库；絮凝基因AbstractFlocculant，asatypeofefficientwatertreatmentagent，caninducethesolidparticles，cells，andcolloidalparticlesinaliquidsuspensiontoflocculateandsubside．Becauseofitsrelevancefortheindustrialprocesses，suc

6、hastapwaterproducing，fermentation，andfoodindustries，flocculanthasbeenthesubjectofthesignificantscientificandbiotechnologicalinterest．Ingeneral，flocculantcanbeclassifiedintoinorganicflocculantandorganicflocculant．Bioflocculantisakindoforganicpolymerthatproducedbymicroorganism．Becaus

7、eofthebiodegradability,bioflocculanthasbeenreceivingmoreandmoreconcernsnowadays．Inthisstudy,wetriedtoexploregenesinvolvedinthebioflocculantbiosynthesisofBacilluslichenifo册如CGMCC2876．AFosmidlibraryfromthebacteriumWasconstructedsuccessfullyandtotal1824recombinantcloneswereobtained．Th

8、erecombinantcloneswithinse