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1、中药麻黄汤HPLC指纹图谱研究姓名：井源博专业：药剂学学号：104753121090中药麻黄汤HPLC指纹图谱研究[摘要]目的:建立中药复方麻黄汤的指纹图谱。方法:采用RP-HPLP法,色谱柱为WatersXTerraRP18(3.9mm×150mm,5μm),流动相为乙腈-10mmol/L碳酸氢铵溶液(用浓氨水调pH至9.5),梯度洗脱,检测波长为215nm;流速0.8ml/min。结果:以麻黄碱为参照峰,标示出麻黄汤10个共有峰,并说明了其药材归属。结论:该方法具有较好的分离效果和良好的精密度,为麻黄汤制剂的质量控制提供了科学依据。[关
2、键词]麻黄汤;高效液相色谱;指纹图谱麻黄汤为医圣张仲景名方,出自《伤寒论》,全方以麻黄为君,配伍桂枝、杏仁、炙甘草所组成,具有发汗解表、宣肺平喘之功效[1],主治太阳伤寒表实证、恶寒发热、头痛身痛腰痛、无汗而喘[2]。现代药理及拆方实验研究表明,麻黄汤中麻黄碱和伪麻黄碱的生理活性及药动学不尽相同,且方中桂枝、杏仁、炙甘草对麻黄碱和伪麻黄碱的药动学影响较为显著[3-5]。因此,笔者试图运用RP-HPLC法,通过建立采用传统方法制备的麻黄汤指纹图谱,为较深入地研究该方有效成分的变化提供分析手段,同时,以期从多药物、多成分的系统化角度实现对麻黄汤
3、及相关制剂的质量控制。1 仪器与材料Waters高效液相色谱仪(Waters2690分离单元,Waters996二极管阵列检测器);盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱对照品由中国药品生物制品检定所提供;麻黄、桂枝、杏仁、炙甘草药材均购于安国药材市场,经解放军第302医院中医药研究所肖小河研究员鉴定为正品,即:麻黄为麻黄科植物草麻黄Ephed-rasinicaStapf.的干燥草质茎,桂枝为樟科植物肉桂CinnamomumcassiaPresl.的干燥嫩枝,杏仁为蔷薇科植物山杏PrunusarmeniacaL.var.ansuMaxim.的干燥成熟种子
4、,甘草为豆科植物甘草GlycyyrrhizauralensisFischer的干燥根及根茎。乙腈为色谱纯,其余试剂为分析纯。2 方法与结果2.1 色谱条件 WatersXTerraRP18色谱柱(3.9mm×150mm,5μm);柱温为30℃;流速:0.8ml/min;检测波长215nm;乙腈210mmol/L碳酸氢铵溶液(用浓氨水调pH至9.5)梯度洗脱:0min,5%乙腈;15min,15%乙腈;35min,30%乙腈;50-60min,60%乙腈。2.2 检测波长的选择 本实验采用二极管阵列检测器,在分析时进行全波长紫外扫描,并在不同
5、波长下获取数据,经比较分析表明215nm色谱图峰形最好,各色谱峰相互之间分离度较好,故检测波长定为215nm。2.3 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱对照品各12.32mg、11.56mg,分别置于25ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,以微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得。2.4 供试品溶液的制备 按麻黄汤的传统配方,取全方各味药材(麻黄9g、桂枝6g、杏仁6g、炙甘草3g),粉碎,混匀,加10倍量水,浸泡30min,加热回流2次,每次1h,合并滤液,适当浓缩并冷冻干燥。精密称取干燥粉末适量置50ml量瓶
6、中,加甲醇2水(1∶1)溶解并稀释至刻度,摇匀,以微孔滤膜(0.45μm)滤过,取续滤液,即得;同法制得单味药材的供试品溶液。2.5 指纹图谱测定的方法学考察2.5.1精密度试验:取同一供试品溶液,连续进样5次,测定HPLC色谱图,结果各共有峰相对峰面积的RSD小于1.5%,相对保留时间的RSD小于1.2%,表明仪器精密度良好。2.5.2 稳定性试验:取同一供试品溶液在室温下保存,分别于0、2、4、8、16、24h进样,HPLC检测,结果其各共有峰的相对保留时间RSD小于1.8%,相对峰面积RSD小于2.3%,表明供试品溶液在24h内稳定性
7、良好。2.5.3 重复性试验:取同批药材配制成的全方,按供试品溶液制备方法平行制备5份麻黄汤供试品溶液,测定液相色谱图,结果各共有峰的相对保留时间的RSD小于2.7%,相对峰面积的RSD小于2.8%,表明方法重复性良好。2.6 麻黄汤指纹图谱的测定及技术参数2.6.1 样品测定:取10批麻黄汤供试品溶液,分别按2.1项下条件进行HPLC分析,比较各色谱图,有10个峰是10份供试液所共有的,因此确定这10个峰为共有指纹峰(图1)。同时取麻黄汤及单味药材样品,按相同条件进行HPLC分析确定各色谱峰来源。通过对照分析,确定共有峰1、9来源于桂枝;
8、共有峰2、7来源于苦杏仁;共有峰3、4、5来源于麻黄;共有峰6,8,10来源于甘草。2.6.2 参照物的选择:在HPLC图谱中选择峰面积较大,出峰时间适中且稳定的色谱峰作为参照峰
