lin28b在结肠癌中表达及其与预后相关性的研究

《lin28b在结肠癌中表达及其与预后相关性的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、博士学位论文／溉LIN28B在结肠癌中的表达及其与预后相关性研究博士研究生：庞明辉指导教师：李国新教授摘要背景与目的近年来，随着人民生活水平的不断提高，饮食习惯和饮食结构的改变以及人口老龄化，我国结直肠癌的发病率和死亡率均保持上升趋势。其中，结肠癌的发病率上升尤为显著。结肠癌的发生发展涉及多基因多阶段，深入研究其关键分子机制为新药开发和临床治疗具有极大的社会价值和现实意义。LIN28B是近年新发现的一个与肿瘤发生发展相关的新基因，其异常表达可促进肿瘤发生发展，它编码一种具有冷休克结构域和反转录病毒型锌指结构的胞浆蛋白，在秀丽隐杆线虫中最先发现，参与维持干细胞“干性”，位于6q21，长度为7

2、52个碱基，GeneBank编号为NM001004317。LIN28B蛋白在胚胎干细胞和发育组织中高表达，随细胞分化而逐渐低表达，在肿瘤组织中则反常高表达。LIN28B实质为一种高度保守的RNA结合蛋白，大小为27kDa，在肝细胞癌中首先得到克隆，能够在肝细胞癌中高表达并和细胞过度增殖相关。目前，LIN28B被认为是“癌胚基因”，可促进细胞恶性转化并特异高表达于部分进展期肿瘤，如肝细胞癌和结肠癌。国内外研究认为LIN28B主要通过抑制非编码的let．7microRNA家族来实现其促癌作用。miRNA是近年来的研究热点，是非编码RNA中的一员，不编码蛋白，但能在转录后降解或抑制靶mRNA翻译

3、而实现基因沉默作用。和蛋白编码基因一样，miRNA基因的最终表达也受到基因组DNA拷贝数、转录因子和表观遗传摘要机制调控、转录后生物加工过程这三个层次的调控。LIN28B通过抑制let-7miRNA家族转录后加工成熟来实现其促癌作用。let-7家族于1993年首次在人基因组中被发现，多种肿瘤组织包括结肠癌中该家族均低表达。let．7家族通过靶向K-RAS、HMGA2、c．Mye、LIN28B及Bcl．xL等癌基因以及E2F2、CCNDl／2等细胞周期相关蛋白来实现肿瘤抑制作用。相反，miR-21高表达于多种肿瘤包括结直肠癌，其靶基因包括PTEN、PDCD4等抑癌基因。目前，let．7和mi

4、R-21被认为分别是经典的抑癌和促癌miRNA。不仅如此，它们还被证明与肿瘤细胞化疗耐药相关。有趣的是，最新的研究证明let．7家族和miR-21共同参与了炎症促进结肠腺癌发生的正反馈信号环路。在该环路中，LIN28B在pri．1et-7转录后多层次抑制其表达，同时let-7也可靶向沉默LIN28B，形成负反馈。LIN28B可由转录因子c-Myc激活，据前述c-Mye也是let一7的靶基因，但c-Myc高表达又能通过激活LIN28而下调let-7。因此，LIN28B和let．7之间形成复杂的相互对抗关系。在这个信号环路中，miR-21位于LIN28B和let-7的下游，但其也通过PTEN间

5、接激活了NF．r．B而参与了该正反馈的维持。另一方面，大量研究认为肿瘤干细胞具有成体干细胞的特点。LIN28／let．7环路调控ALDHl阳性肿瘤干细胞的“干性”，LIN28和OCT4则与卵巢癌干细胞相关。反之，Raf激酶抑制蛋白(Rafkinaseinhibitoryprotein，RKIP)能通过LIN28／let．7环路而抑制胃癌转移发生。综上，LIN28B非常可能参与结肠癌的发生发展。转移和复发是导致结肠癌患者死亡的两个最主要的死亡原因，最新研究结果表明，在结肠癌中LIN28B高表达与结肠癌的转移复发相关。化疗是目前结肠癌综合治疗中的重要一环。奥沙利铂是结肠癌化疗的一线用药，但结肠

6、癌细胞对奥沙利铂的耐药性严重影响化疗效果，研究其内在机制有助于提高化疗效果并降低结肠癌术后复发及转移。RNA干扰是近年来兴起的新技术，它可以通过短发夹RNA(smaUhairpinRNA，shRNA)与体内靶mRNA结合，从而产生序列特异性基因沉默，该方法目前成为研究基因功能及筛选分子靶向药物的良好工具。TI博士学位论文截至目前国内尚无LIN28B在结肠癌组织中的表达情况及其与病人淋巴结转移、远处转移等病理特点及生存复发情况关系的报道。此外，国内外关于结肠癌细胞中LIN28B基因表达及其与奥沙利铂化疗敏感性的研究尚属空白。本研究第一部分利用EnVision免疫组织化学技术检测美国Bioma

7、x结肠癌组织芯片(208例结肠癌，8例正常组织)和南方医科大学南方医院149例手术切除石蜡切片中LIN28B的表达并进行染色评分，采用卡方检验比较不同LIN28B表达水平和结肠癌临床病理性特征之间的关系，采用Kaplan．Meier法及Log．rank检验进行生存分析，采用Cox比例风险模型进行结肠癌生存和复发的单因素和多因素分析，判断LIN28B在结肠癌预后中的临床价值。第二部分我们构建干扰LIN28B的shRNA质粒