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《植物性饲料中植酸磷水解度测定方法的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。
1、植物性饲料中植酸磷水解度测定方法的研究摘要:研究了测定植酸酶降解植物性饲料中植酸磷程度的方法。该方法通过钒钼酸铵比色法测定植物性饲料水解液中磷的含量,进而求出其中植酸磷的水解度,并和重量法进行相关性比较,结果表明该方法是一种简便、快捷、准确度和精密度高的方法。关键词:植物性饲料;植酸酶;水解度;植酸磷;钒-钼酸铵比色法;重量法AStudyonDeterminingMethodforHydrolysisDegreeofPhosphorPhytateinVegetableFeedsABSTRACT:Amethod
2、fordeterminingthedegradationofphosphorphytatedegreeinvegetablefeedsbyphytasewasstudied.Thephosphorcontentindigestofvegetablefeedswasdeterminedbyvanadiumammoniummolybdatecolorimetry,thenthehydrolysisdegreeofphosphorphytatewasdeterminedandtherelativitywithgra
3、vimetricmethodwascompared.Theresultshowedthatthiswasasimple,rapid,high-accurateandexactmethod.KEYWORDS:vegetablefeed;phytase;degreeofhydrolysis;phosphorphytate;vanadium-ammoniummolybdatecolorimetry;grav-imetricmethod植物性饲料中磷的40%~80%以植酸磷形式存在[1]。这样不仅降低单胃动物对磷的有
4、效吸收,还影响动物对饲料中蛋白质和钙、锰、铁等无机微量元素的吸收利用[2]。据报道,植酸酶添加到植物性饲料中能把植酸最终降解为肌醇和磷酸,增加动物对饲料中磷的吸收,从而降低磷排量,减少对环境的污染[3]。另外植酸酶还能把螯合在植酸上的营养物质给释放出来,提高饲料能量、蛋白质和矿物质的利用率和动物生产性能[4]。为了更好地研究植酸酶对植物性饲料中植酸磷的降解,本实验确定一种测定植物性饲料中植酸磷水解度的实验方法。该方法操作简便,准确度、灵敏度、精密度高。1材料和试剂1.1主要仪器UV-2102PC型紫外可见分光
5、光度计:上海尤尼柯仪器有限公司;台式离心机:上海安亭科学仪器厂;精密酸度计:上海虹益仪器仪表有限公司;78HW-1恒温磁力搅拌器,金坛市华峰仪器有限公司;电热恒温水浴锅,天津市泰斯特仪器有限公司。1.2试剂浓硝酸;(1+1)硝酸溶液:1体积浓硝酸与1体积蒸馏水混匀;(1+2)硝酸溶液:1体积浓硝酸与2体积蒸馏水混匀;高氯酸;6mol/L盐酸;1mol/L盐酸;pH值5.5的乙酸缓冲液:准确称取34.02g无水乙酸钠和0.1g吐温20于烧杯中,加入900ml蒸馏水溶解,用盐酸调节溶液pH值至5.50?0.01,
6、移入1000ml容量瓶中,并定容至刻度(室温保存2个月有效);100g/L钼酸铵:称取钼酸铵10.00g,加入浓氨水1.0m,l用蒸馏水溶解,移入100ml容量瓶中并定容至刻度;2.35g/L钒酸铵:准确称取0.2350g偏钒酸铵,加入2.0ml(1+2)硝酸并用玻璃棒搅拌使之成细糊状,加蒸馏水溶解,移入100ml棕色容量瓶中并定容至刻度(避光保存1周有效);显色剂:2份(1+2)硝酸溶液,1份钼酸铵溶液,1份钒酸铵溶液混合即得;50mmol/L基准磷酸二氢钾:准确称取0.6804g在105e烘至恒重的基准磷
7、酸二氢钾,用pH值5.5的乙酸缓冲溶液溶解,并定容至100m;l喹钼柠酮试剂:称取钼酸钠70g,加蒸馏水150ml溶解,为溶液Ñ,称取柠檬酸60g,加水150ml和浓硝酸85ml溶解,在搅拌下将溶液Ñ倒入其中,为溶液Ò,量取蒸馏水100m,l加浓硝酸35ml和喹啉5m,l将该混合液缓缓倒入溶液Ò中,放置24h,过滤于1000ml的容量瓶中,加丙酮280m,l用蒸馏水定容至刻度,混匀后贮存于塑料瓶中(有效期半年)。1.3原料植物性饲料(米糠粕):市场上购得;植酸酶:夏盛实业集团有限公司,5000U/g。2分析方
8、法2.1测定原理植酸酶属于磷酸单酯水解酶,在弱酸条件下可以把植酸磷水解成肌醇和正磷酸盐,得到的正磷酸盐在酸性条件下可以与钒钼酸铵反应生成黄色钒钼磷酸,可比色测定其中的无机磷,进而求出植物性饲料中植酸磷的水解度。2.2水解液的制备准确称取6份50g(精确至0.0001)植物性饲料,分别与150g水混匀,用6mol/L盐酸调pH值为4.0,然后分别加入相对植物性饲料0、0.02%、0.05%、0.08%
