北虫草发酵茵丝体主要营养成分分析

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1、湖南农业科学2007，(6)：178～179HunanA—culturalSciences匦塑塑北虫草发酵茵丝体主要营养成分分析魏宝阳1，魏林2，梁志怀2，高国赋1，胡超1，曹杏芝1(1．湖南农业大学生物科学技术学院，湖南长沙410128；2．湖南省植物保护研究所，湖南长沙410125)摘要：对自有北虫草菌株的液体发酵菌丝体的主要化学营养成分的含量进行了分析。结果表明，该发酵菌丝体可溶性多糖含量为16．50％，甘露醇的含量为120,mo／s．腺苷为3．90me,／g，鸟苷为2．58rn∥g．均高于已报道的北虫草的含量。关键词：北冬虫夏草；发酵培养；成分分析中图分类号：

2、S567．35文献标识码iA文章编号：1006—060X(2007)06—0178—02北虫草(Cordycepsmilitaris(L．)Link．)，又称北冬虫夏草，俗称蛹虫草，是冬虫夏草种的一种。冬虫夏草具有显著的药用价值，国内外对其需求量与日俱增。但受生长条件的限制，天然虫草产量很有限，野生资源已受到过度的采掘，产量逐年减少，销售价格越来越高，供求矛盾越来越大，远远不能满足市场需求。为了解决野生资源过少、药源过度紧缺的状况，寻求虫草新资源、新品种、新开发途径就显得特别重要，本文通过对北虫草液体发酵菌丝体主要活性物质的含量的分析，为大规模生产虫草菌丝体，使其成为

3、天然北虫草的替代品作营养品或药品提供参考依据。l材料与方法1．1材料北冬虫夏草发酵菌丝体由湖南省植物保护研究所制备并提供。1．2方法1．2．1多糖含量的测定精确称取北冬虫夏草发酵菌丝体干粉5g，用98℃热水抽提3次，每次1h，过滤并将滤液浓缩，用4倍体积95％乙醇静置过夜，在5000r／min下离心15min，去上清液，沉淀用85％乙醇洗2次，沉淀即为虫草菌丝粗多糖。称取北虫草粗多糖15IIlg，用蒸馏水溶解，定容至50Illl，收稿日期；2007—05—14基金项目：湖南省农业科学院重点学科资助项目作者简介：魏宝阳(1974一)，男，湖南湘潭市人，讲师，主要从事微生

4、物教学研究工作。通讯作者：魏林摇匀，即得供试液。量取供试液3．0111l，用蒸馏水定容至10IIll。再从其中取1．0ml、加入蒽酮试剂0．5nll和浓硫酸3．0rnl，立刻摇匀，冷却至室温，于624nm处测光吸收值。1．2．2核苷类成分的HPLC分析(1)供试溶液制备：准确称取北冬虫夏草发酵菌丝粉末O．1g，置于10rIll试管中，加70％甲醇5rnl，超声提取30min，4000r／rain离心10min，取上清液移入5IIll容量瓶，用水定容至刻度，摇匀，用0．45／．tm滤膜过滤，滤液即为供试液。(2)洗脱梯度及参数：A相为三蒸水，B相为甲醇，洗脱梯度为：0m

5、in：100％A+O％B一8min：90％A+10％B一10min：85％A+10％B一30rain：85％A+15％B一35min：20％A+80％B·40min：0％A+100％B—，45min：100％A+0％B。(3)HPLC参数：进样量20止，柱温40℃，检测波长259nm；填料：YWGC一18(4．6×300mm)(大连依利特科学仪器有限公司)。1．2．3甘露醇的含量测定准确称取北冬虫夏草发酵菌丝体粉末2．5g，用75IIll蒸馏水100℃水浴提取2h。过滤，定容至100ml，从上清液中取0．03IIll，补水至1ml。利用高碘酸钠与甘露醇反应产生黄色的3

6、，5一二乙酰一1，4脱氢二甲基砒啶，在413nm处测量光吸收值。2结果与分析2．1北虫草液体发酵菌丝体多糖含量回归方程为：C=0．0564A+0．0019，R2=0．9988；共重复5组进行加样回收率试验，得到平均加样回收率为93．04％，其RSD为1．85％；稳定性万方数据燕6囊魏宝聚等：麓蠢葶发鹫蘸丝俸圭要饕舞残分分爨董7擎实验：分别在15min、30min、45min、60min、75min、90min、105．fin翻120min进行多糖含量测爱，其RSD为0．72％；测得其多糖含量为16．50％。通过上述实验，可以知道测量的实验方法和结果可信。2。2疵虫草液

7、体发酵茵丝薅撅苷类成分的HPLC分析结果经各核苷单体标样及混合标样的HPLC分析，各核赘蕈俸标梯洗麓峰的绦留翼重阕与混合标样中各组分洗脱峰的保留时间基本一致，备标样的出峰时间分别为：胞苷8．0±0．2min；尿苷10．1±0．2．fin；2一袋缀鸟营15。5±0．1min；2一脱氧愍苷16。8囊0。2min；腺苷18．5士0．3rain；2一脱氧腺苷19．8士0．3min。检测发现，北虫草液体发酵菌丝体中主要含有豫营穰尿苷，这蓠拿核黄椽样酶标准遴线分别如下：腺苷Y=64697X一169959，R2=0．9938；尿瞥Y=75836X+262770，R