电致化学发光-分子印迹传感器测定￡.苯丙氨酸

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1、万方数据第41卷2013年10月分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告ChineseJournalofAnalyticalChemistry第10期1543～1548DOI：10．3724／SP．J．1096．2013．21201电致化学发光-分子印迹传感器测定￡．苯丙氨酸丁照云李春阳宋启军4(江南大学化学与材料工程学院，无锡214122)摘要在三联吡啶钌固相电极上，采用溶胶一凝胶法电沉积分子印迹聚合物，制得电致化学发光．分子印迹传感器。研究了该传感器的电化学和电致化学发光性能。结果表明，此传感器对￡

2、一苯丙氨酸具有很高的检测灵

3、敏度和良好的选择性。在优化的条件下，测定￡一苯丙氨酸的线性范围为1．0x10‘11～1．0x10。8mol／L，检出限为3．1x10。12moL／L。此传感器可应用于尿样中￡一苯丙氨酸的测定，回收率为94．8％。110．6％。关键词电致化学发光；分子印迹；L-苯丙氨酸；溶胶．凝胶1引言￡一苯丙氨酸(Phe)是人体8种必需氨基酸之一，在多种疾病的诊断治疗和病理学研究上具有重要意义‘1。。。目前测定Phe的方法有高效液相色谱法Hj、气相色谱一质谱法∞]、电化学法哺1等，但这些方法存在灵敏度不高、选择性不好、仪器昂贵等问题。电致化学发光法

4、(ECL)因其灵敏度高、仪器简单、检测快速等优点，已被应用于氨基酸的检测[7’8]。三联吡啶钌(Ru(bpy)；+)是目前应用最广泛的发光试剂。由于Ru(bpy)；+参与化学反应前后的形态和性质基本保持不变，将其固定到电极上反复使用，不仅节约了试剂，有效降低了检测成本，还简化了实验装置‘9川1。分子印迹聚合物(MIP)对目标分子具有良好的特异性识别的能力，已被广泛应用于化学、生物等诸多研究领域。溶胶一凝胶法制得的印迹传感器具有物化性质稳定，检测快速且操作简便等优点¨2I。已有文献报道用该印迹传感器测定血浆样品中的L．苯丙氨酸，检出限

5、为1．0x104mol／L[13I。将电致化学发光和分子印迹技术相结合，既可解决电致化学发光法的选择性问题，又可有效提高分子印迹传感器的检测灵敏度¨4—6。。本研究在Ru(bpy)；+固相电极上电沉积溶胶一凝胶分子印迹膜，制备了一种对Phe的测定兼有高灵敏度和良好选择性优点的传感器。此传感器可应用于尿样中Phe的快速检测。2实验部分2．1仪器与试剂MPI—E电致化学发光分析系统(西安瑞迈分析仪器有限责任公司)，光电倍增管高压为_600V；S-4800扫描电子显微镜(日本日立集团，SEM)；CHl660D电化学工作站(上海辰华仪器有限

6、公司)；三电极体系：工作电极为直径为3mm的玻碳电极(GCE)，对电极为铂丝，参比电极为Ag／AgCl电极(填充液为饱和KCl溶液)。多壁碳纳米管(①20～40nm，MWCNTs，深圳纳米港有限公司)；Nation(5％低级脂肪醇和水的溶液)、三联吡啶钌(98％，Sigma-Aldrich公司)；四乙氧基硅烷(98％，TEOS，百灵威科技有限公司)；三甲氧基苯基硅烷(98％，PTMOS)、三甲氧基(甲基)硅烷(98％，MTMOS)，购于梯希爱(上海)化成工业发展有限公司；L一丙氨酸(Ala)、L一缬氨酸(Val)、L一谷氨酸(Glu

7、)、L．甘氨酸(Gly)、L．赖氨酸(Lys)、三一脯氨酸(Pro)、L一精氨酸(Arg)、L-苯丙氨酸(均为生化试剂)及其它试剂购自国药集团化学试剂有限公司；0．05mol／L磷酸盐缓冲溶液(PBS)；实验用水为超纯水。2013旬1-29收稿；2013-04．12接受本文系国家自然科学基金项目(No．21175060)资助}E—mail：qsong@jiangnan．edu．cn万方数据1544分析化学第41卷2．2传感器的制备首先，称取0．5gMWCNTs加入含45mL浓H：SO。和15mL浓HN03的混合液中，室温下磁力搅拌2

8、d，水洗至中性，用孔径为0．22¨m的微孔滤膜抽滤，80℃恒温干燥4h，红外灯下研磨30min备用。准确称取1mg酸化的MWCNTs，加入0．9mL异丙醇和0．1mLNation，超声分散至静置无沉淀为止。移取3恤L分散液滴涂于处理好的玻碳电极表面，自然晾干。置于1．0×104mol／LRu(bpy)j+溶液中，30min后取出，用水冲净，自然晾干，制得固相发光电极(ECL电极)。Nation电极的制备过程除不加MWCNTs外，与ECL电极的相同。将1．5mLTEOS、1．5mL无水乙醇、0．1mLPTMOS、0．1mLMTMOS、

9、0．1mLHCl(0．01mol／L)和0．5mLH，O混合并超声2h，得到澄清均一的电沉积底液。取一半底液加入0．1mL0．01mol／LPhe溶液，超声30min，得印迹溶胶。将ECL电极置于印迹溶胶中，以50mV／s的扫描速率循