amhrⅱ、insr基因dna甲基化与pcos表观遗传学研究

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1、暨南大学硕士学位论文观察相关基因是否存在表观遗传学的改变来解释有关高度异质性和家族聚集现象。DNA甲基化分析是常用的手段之一，从表观遗传学角度分析PCOS相关基因的DNA甲基化程度有望发现PCOS发病机制的可能原因，因而成为近年研究PCOS的热点。本研究主要通过收集PCOS患者的临床信息资料，描述其临床上的基本特征，并通过与正常人群的比较，研究和分析各种PCOS临床特征与AMHRII、INSR受体在卵巢、子宫内膜局部的定位、分布及表达，以及通过对两种受体基因DNA甲基化的关联性，探讨PCOS高度异质性和家族聚集现

2、象与表观遗传学关系，为进一步阐明PCOS的发病机制提供新的思路。目的1．通过收集PCOS患者基本信息和临床资料，描述和分析其临床基本特征。2．采用免疫组织化学方法，分析和比较AMHRII、INSR在PCOS患者卵巢和子宫内膜的定位、分布及表达，描述AMHRII、INSR在卵巢、子宫内膜病理变化与临床特征的关联性。3．通过重亚硫酸盐处理测序法定量分析AMHRII、INSR基因DNA甲基化程度与临床特征的关系，探讨DNA甲基化与PCOS临床特征、异质性和家族聚集现象的关系，进一步阐明PCOS与表观遗传学的关系。方法1

3、．PCOS患者临床资料收集和分析随机收集2014年03月—2014年12月在广东省计划生育专科医院门诊就诊及住院的95患者为研究对象，完成问卷填写相关信息、B超检查和其他临床资料。2．血液生殖相关激素测定采集患者月经周期第2-4天血液，采用ELISA法检测血清雌二醇(E2)、孕激素（P）、睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)水平，计算卵泡刺激素/黄体生成素(FSH/LH)比值。空腹胰岛素（FINS）及空腹血糖（FPG）值，并计算HOMA-IR指数。3．病理组织形态学分析及鉴定取卵巢、子宫内膜组织后

4、固定石蜡包埋，采用HE染色的方法进行病理组织形态学观察和分析。4．蛋白定位表达情况分析采用免疫组织化学（Immuno-Histochemistry，II万方数据暨南大学硕士学位论文IHC）方法分别标记AMHRII和INSR，观察其在卵巢、子宫内膜中的定位、分布。5．受体基因甲基化的测定与分析采用重亚硫酸盐处理测序法定量检测两组血液AMHRII、INSR基因DNA甲基化程度，软件计算甲基化率。6．统计学分析采用SPSS21软件进行分析统计，分析AMHRII、INSR基因DNA甲基化程度与临床特征的关系，以及阐明PC

5、OS与表观遗传学作用机制。结果1．PCOS患者临床资料基本特征收集的95例PCOS患者中，临床特征表现多样化，符合PCOS临床诊断标准；75例PCOS患者临床特征中，表现月经正常组18例，占24%；表现多囊卵巢改变54例，占72%；表现高雄激素或高雄激素体征共53例，占70.7%；表现胰岛素抵抗48例，占64%。表现月经正常组与稀发组两组之间的比较，月经稀发组年龄低，两者比较有显著性差异（P<0.05）。表现IR组与无IR两组之间，IR组表现月经稀发现象，两者比较有显著性差异（（P<0.05）。2．病理组织形态学

6、HE分析PCOS患者卵巢可见多个扩张的囊泡，颗粒细胞层数减少，间质增生，成熟黄体少见；正常组见不同发育阶段的卵泡，颗粒细胞层较厚，可见成熟黄体。PCOS患者组子宫内膜增厚，腺上皮细胞增生，腺体扭曲，间质明显增生；正常组子宫内膜未见明显增生。3．免疫组织化学分析AMHRII、INSRAMHRII、INSR在PCOS患者组及对照组的卵巢、子宫内膜均有表达。AMHRII、的表达主要定位于细胞膜，INSR表达主要定位在细胞浆，PCOS患者组INSR在卵巢颗粒细胞、卵巢间质细胞均有表达。AMHRII在颗粒细胞中表达更明显，

7、卵巢间质中见少量分布。对照组AMHRII、INSR主要在未成熟卵泡颗粒细胞表达，间质中见少量分布。PCOS患者组见INSR强阳性表达，整体高于对照组。AMHRII在卵巢中的表达稍高于对照组，INSR在PCOS及对照组卵巢中表达无明显差异，AMHRII在PCOS及对照组子宫内膜表达无明显差异。4．重亚硫酸盐处理测序法定量分析DNA甲基化4.1AMHR2基因DNA甲基化60例样本AMHR2基因DNA甲基化的共检测四个位点，其中PCOS组40例，正常组20例，其中P1、P2两组间无显著III万方数据暨南大学硕士学位论文

8、差异；其中P3、P4两组间有显著差异。在40例PCOS组内包括①月经稀发②高雄激素血症或高雄激素体征③一侧或双侧卵巢多囊样变三项临床表现，满足其中两项或三项症状齐全，共分四组，它们组间无相关性（P>0.05）；PCOS组内不同临床特征进行AMHRII基因甲基化程度与胰岛素抵抗关系有显著差异（R=0.532，p=0.00）。4.2INSR基因DNA甲基化60例样本INSR基