GBT27623.1-2011-渔用抗菌药物药效试验技术第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验.pdf

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1、ICS11．220B50缮亘中华人民共和国国家标准GB／T27623．1—2011渔用抗菌药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验Pharmacodynamictesttechnicalspecificationforaquacultureantimicrobialagent--Part1：Antibioticssusceptibilitytestofmacro-brothdilutionmethod2011-12-30发布2012-04-01实施宰瞀鹊鬻瓣警糌瞥星发布中国国家标准化管理委员会促111标准分享网www.bzfxw.com免费下载刖昌GB／T27623((渔用抗

2、菌药物药效试验技术规范》分为两个部分一第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验；一第2部分：人工感染防治试验。本部分为GB／T27623的第1部分。本部分按照GB／T1．1～2009给出的规则起草。本部分由中华人民共和国农业部提出。本部分由全国水产标准化技术委员会(SAC／TC156)归口。本部分起草单位：中国水产科学研究院黄海水产研究所。本部分主要起草人：刘淇、李健、王群、戴芳钰。GB／T27623．1—2011标准分享网www.bzfxw.com免费下载1范围渔用抗茵药物药效试验技术规范第1部分：常量肉汤稀释法药物敏感性试验GB／T27623．1—2011GB／T27623的本部分规定了渔用

3、抗菌药物的常量肉汤稀释法药物敏感性试验所需的试剂和材料、仪器设备、操作步骤和质量控制。本部分适用于渔用抗菌药物的常量肉汤稀释法药物敏感性试验。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法中华人民共和国兽药典(2010年版)中华人民共和国农业部公告第1521号3试剂和材料3．1化学试剂除非另有说明，本部分使用确认为分析纯的化学试剂。3．2实验用水除非另有说明，应符合GB／T6682中三级水的规格。3．3Mueller-Hint

4、on琼脂(M-H琼脂)培养基按产品说明用干粉培养基制备平板，其中用于弧菌试验的M—H琼脂培养基中需添加1．5％的氯化钠。3．4Mueller-Hinton肉汤(M-H肉汤)培养基按产品说明用干粉培养基制备M—H肉汤，其中用于弧菌试验的M-H肉汤培养基需添加氯化钠至终浓度为1．5％。每一批M-H肉汤培养基的pH值在室温下应为7．2～7．4，应含有20mg／L～25mg／LCa2+和10mg／L～12．5mg／LMg“。如果采用原子吸收光谱法等方法测得培养基Ca2+和M92+含量不够时，应向培养基中添加适量无菌的ca2+和M92+溶液(镁离子和钙离子溶液的制备方法见附录A)；添加了Ca”和Mg”的

5、M—H肉汤培养基不可再次高压灭菌。3．50．85％无菌生理盐水称取8．50g(精确到0．01g)分析纯氯化钠，加入1L蒸馏水溶解后121℃15rain高压灭菌。标准分享网www.bzfxw.com免费下载GB／T27623．1—20”3．6实验菌株3．6．1实验菌株应选用来自国家级微生物菌种保藏中心的标准致病菌株或具有资质的菌种保藏机构提供的分类地位明确的致病菌株，也可以使用临床分离的致病菌株，使用I晦床分离的致病菌株时应至少鉴定至属。其中质控菌株为荧光假单胞菌(ASl．180)和副溶血弧菌(ASl．1614)，质控菌株应来自国家级微生物菌种保藏中心或具有资质的菌种保藏机构。3．6．2日常使用

6、的质控菌株荧光假单胞菌应在M-H琼脂上，副溶血弧菌应在添加1．5％氯化钠的M—H琼脂上于4℃～8℃的冷藏箱中保存；质控菌株的使用代次为3代～14代；质控菌株应至少一个月更换一次，由冻干或超低温冷冻保存菌种移种或购买新菌种。3．7质控药物：盐酸土霉素，含量95％以上，应符合《中华人民共和国兽药典(2010年版)》要求。4仪器设备4．1恒温箱：可满足28℃士1℃。4．2移液器：量程40pL～200／zL、100弘L～1000弘L、1000pL～5000／zL。4．3无菌操作台：可满足无菌要求的洁净工作台、生物安全柜或无菌室等。4．4分析天平：精确至1mg。5操作步骤5．1抗菌药物母液的制备5．1．

7、1抗菌药物母液的浓度抗菌药物母液的浓度应至少为最高测试浓度的10倍，但对于某些溶解性低的抗菌药物可以制备较低浓度的母液。5．1．2溶剂和稀释液用于制备抗菌药物母液的溶剂和稀释液见附录B。除蒸馏水可高压灭菌外，其余应采用0．22pm微孔滤膜过滤除菌。5．1．3母液的制备称取不低于0．10g抗菌药物，精确到1mg；在无菌条件下使用5．1．2中溶剂和稀释液配制抗菌药物母液。5．2抗菌药物药液浓度的建立抗