番茄转录辅激活子lembf1在转基因材料中的功能分析

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1、重庆大学硕士学位论文中文摘要要转录辅激活因子在真核基因表达中通过桥连转录因子／其他调控元件和基础转录装置起着十分重要的作用。根据转录辅激活因子的作用可将其分为两类：一类是促进或保持修饰染色质结构的酶的活性；一类是通过与转录因子结合促进一般转录装置与启动子的结合，多蛋白桥梁因子(multiproteinbridgingfactor1，MBFl)就属于这一类。MBFI是一个高度保守的关于内皮细胞分化、激素调节、脂类代谢、中枢神经系统发育和组氨酸新陈代谢等不同过程的转录辅激活蛋白，不同有机体的MBFl蛋白通过与C．Jun、GCN4、ATFl或其他核受体的相互作用连接TATA盒蛋白

2、激活基因转录。植物MBFls参与植物的生长发育和多种胁迫反应，超表达MBFI可以调节多种信号转导途径和激活多种防御因子的表达，提高植物对多种胁迫的抵抗力，如高温，干旱，病原菌侵染等，为培育高抗性的转基因作物提供了新的路径。目前在番茄中关于此基因还没有相关的报道，本论文拟通过在番茄中超表达MBFl基因研究其对逆境胁迫的抗性能力，从而明确MBFl基因的分子作用机制，主要研究内容及结果如下：l、再生番茄植株的获得将LeMBFl基因与经nfI酶切的pDH51载体连接形成中间载体，再经EcoRI酶切获得了包含35S启动子、MBFl基因、35S终止子的片段，此片段与经EcoRI酶切的p

3、BINl9载体连接，构成双元表达载体质粒pBINl9．MBFl。以AC++番茄子叶为外植体，通过农杆菌LBA4404介导，将CaMV35S启动子调控下的MBFl基因转入番茄，经过50mg／LKan及500mg／L的Sm筛选，获得一部分生根的再生植株。2、Southern分析选择11个转化株系进行Southern分析，结果表明在这些转化株系中有8个是多拷贝，有3个是单拷贝。3、Northern分析选择04、05、08和09进行Northern分析，检测结果显示这4个株系中LeMBFl均获得表达。4、下游基因检验克隆番茄Actin、咫J、袱2、PR4、PR6、Pti4、HSP9

4、0、Apx2、CHS和Zat基因的片段，以Actin为内参，在AC++植株和转基因植株中进行半定量RT-PCR分析。结果显示：1)HSP90、apx2、Zat、咫J、PR4和PR6基因的表达水平在LeMBFl重庆大学硕士学何论文中文摘要超表达植株中均明显增强，LeMBFl正调控这些基因；2)CHS，PR2和Pti4基因的表达水平在AC++植株和转基因植株中没有明显变化，表达量基本一致。5、生物胁迫实验用芽孢杆菌侵染AC++和转基因植株的叶片，利用平板菌落计数法检测叶片上的菌落总数。结果显示：转基因植株对细菌的抵抗力显然比AC++植株强。用赤霉菌侵染Ac++和转基因植株的叶片

5、，以Actin为内参进行半定量RT-PCR分析下游防卫反应基因的表达。结果显示：1)在AC++植株中，LeMBFl、袱』、PR2、PR4、PR6和Pti4基因的表达水平明显增强。2)在转基因植株中，LeMBFl、PR2、PR4、PR6和Pti4基因的表达水平明显增强，但PRl基因的表达水平轻微减弱。3)与AC++植株相比，转基因植株中LeMBFl、袱2、PR4和Pti4基因的表达水平明显较高，而是PRI和PR6基因的表达水平反而低。LeMBFl可能通过激活部分朋s和Pti4基因的表达提高植物的抗病性。6、高温实验将AC++植株和转基因植株放置于39。C高温，统计植株在高温下

6、的存活率。结果显示：转基因植株的耐热性比AC++植株强。利用半定量RT．PCR分析高温条件下防卫反应相关基因在AC++和转基因植株中的表达。结果显示：1)在AC++和转基因植株中，LeMBFl、袱J、HSP90、Apx2、CHS和Zat基因的表达水平均明显升高。2)与AC++植株相比，转基因植株中LeMBFI、袱J、HSP90、Ap也和Zat基因的表达水平明显较强，而C邯基因的表达水平在30min内较强，随后反而稍弱。LeMBFl可能通过激活袱J『、HSP90、Apx2和Zat基因的表达提高植物的耐热性。关键词：逆境胁迫，转录辅激活子，LeMBFl，表达分析Ⅱ重庆大学硕士学

7、位论文英文摘要ABSTRACTTranscriptionalcoactivatorsplayacrucialroleineukaryoticgeneexpressionbycommunicatingbetweentranscriptionfactorsand／orotherregulatorycomponentsandthebasaltranscriptionmachinery．Theyaredividedintotwoclasses：transcriptionalcoactivatorthatrecruitorp