低频超声联合微泡剂对血管内皮细胞和肝癌细胞生物学效应的体外实验

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1、中文摘要低频超声联合微泡剂对血管内皮细胞(EVC一304)和肝癌细胞(SMMC-7721)生物学效应的体外实验东南大学医学院肿瘤内科研究生房良华导师姜藻中文摘要目的：本课题研究低频超声(10w-f}_cqu朗cydtrasound)联合微泡剂(microbubbleagent)对血管内皮细胞株(EVC-304)和肝癌细胞株(SMMC一7721)的损伤和诱导凋亡作用，初步探讨其对两种细胞生物学效应，为低频超声联合微泡剂治疗肿瘤提供实验依据。方法：血管内皮细胞株(Evc-304)和肝癌细胞株(SMMC一7721)均分为四组：A组：空白对照组

2、，B组：单纯微泡剂组(由碳酸氢钠，维生素C和HES代血浆按一定比例配制成)，C组：单纯低频超声组，D组：低频超声联合微泡剂组。应用MTT法检测观察细胞增殖抑制率以选择较佳的超声照射时间和照射后继续培养的时间；流式细胞仪检测细胞的凋亡；透射电镜检测细胞形态的改变；应用分光光度法检测细胞培养液中活性氧自由基(ROS)的活力和超氧化物歧化酶(SOD)的活力；Westemblot检测NF-KB蛋白表达水平。结果1．EVC．304和SMMC．7721的超声联合微泡剂组细胞增殖受到明显的抑制，辐照120s孵育24h后血管内皮细胞的存活率为49±4．

3、2％，肝癌细胞为51±3．5％。与对照组比较差异显著(P<0．01)。单纯超声组与对照组比较差异有显著性俨<0．05)。超声联合微泡剂组存活率明显低于单纯超声组，两者比较差异有显著性。单纯微泡剂组与对照组比较无明显差异口>o．05)。从实验中观察到辐照120S培养24h后细胞存活率最低，在以后的实验中应用超声辐照120s孵育24h作为实验条件。2．两种细胞的超声联合微泡剂组细胞凋亡明显，与对照组比较差异显著俨

4、照组比较差异明显(，<0．05)，但其凋亡率低于超声联合微泡剂组，两组比较差异有显著性(P<0．05)。单纯微泡剂组细胞凋亡率与对照组比较差异无显著性俨>0．05)；3血管内皮细胞的超声联合微泡剂组发现大部分细胞出现不同程度的改变，主要表现为细胞核固缩，核内染色质聚集于核膜，内侧呈团块或新月状，并可见凋亡小体形成，胞质空泡化，出现大小不一的空泡及胞质崩解，可见线粒体肿胀，部分细胞胞膜破裂；细胞表面微绒毛减少，甚至消失。在肝癌细胞的超声联合微泡剂组观察到了类似的改变。对照组、单纯微泡剂组和单纯超声组细胞胞膜完整，细胞器结构正常，染色质均匀

5、。4．血管内皮细胞和肝癌细胞超声联合微泡剂组在辐照后的60minROS活力显著升高，血管内皮细胞东南大学硕士学位论文为(833．14±5．9)u／ml，肝癌细胞为(1107．33±11．75)u／ml，与对照组比较差异显著俨《o．oD；SOD活力明显降低血管内皮细胞为(69．524-2．81)u／ml，肝癌细胞为(58．874-1．91)u／ml，与对照组比较差异显著(P

6、单纯超声组SOD活力降低与对照组比较差异明显俨<0．05)，但该组SOD活力明显高于超声联合微泡剂组，两组比较差异有统计学意义妒<0．05)。两种细胞的单纯微泡剂组ROS、SOD活力与对照组均无明显差异(尸>O．05)。5血管内皮细胞和肝癌细胞超声联合微泡剂组NF-r,B蛋白灰度值明显高于其他各组，与对照组比较差异有显著性(尸<0．oD。与单纯超声组比较差异显著伊<0．05)，与单纯微泡荆组比较妒<0．01)。结论：l超声联合微泡剂具有明显的抑制离体血管内皮细胞和肝癌细胞的增殖，并诱导其损伤和凋亡的作用；2超声联合微泡剂所致的细胞外活性

7、氧的活力增高，SOD活力的降低，NF．KB的表达增高等与细胞的损伤和凋亡作用相关。关键词：低频超声；微泡剂；活性氧自由基；EVC．304；SMMC一7721Ⅱ英文摘要Thebio．effectsoflow．仔equencyultrasoundcombinedwithmicrobubbleagentonVEC．304celllineandSⅣMC．772lcelllineinvitroDivisionofoncology,MedicalCollegeofSoutheastUniversity,NanjingPostgraduatestud

8、ent：FANGLiangHuaSupervisor：JIANGZaoABSTRACTobjecfive：111estudyistoinvestigatethebio·effectsofVEC-304、SM