肉苁蓉属4种肉苁蓉差异蛋白质组学的研究

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1、．I节●摘要论文以肉苁蓉属4种肉苁蓉(荒漠肉苁蓉、盐生肉苁蓉、管花肉苁蓉和沙苁蓉)为材料，利用差异蛋白质组学研究技术，研究了肉苁蓉属可溶性蛋白质的特性，主要结果如下：1．建立了适合肉苁蓉属可溶性蛋白质的SDS．PAGE凝胶电泳技术方法：1)建立了肉苁蓉属可溶性蛋白的提取方法：采用冷冻干燥_提取液[1mol／LTris--HCL(pH6．8)5％(vⅣ)；双蒸水75％(v／V)；PVP2％；苯甲基黄酰氟(PMSF)lmmol／1]---,4。C离心一5mol／L的KAc沉淀一4℃离心一一20。C丙酮沉淀_4℃离心的技术路线，能较好的提取肉苁蓉的可溶性总蛋白，

2、避免多糖、酚类等杂质成分对后续电泳的干扰。2)建立了适合肉苁蓉属可溶性蛋白质SDS—PAGE电泳技术方法：电泳时采用的参数为：浓缩胶T=3％；分离胶T=16％；电泳开始时电压为180V，电泳进入分离胶时电压调为210V。2．采用SDS．PAGE电泳分离技术和～phaImager2200软件分析方法，对4种肉苁蓉蛋白质表达谱进行比较研究，肉苁蓉属的4种肉苁蓉在电泳胶上清晰地分离出大约15条蛋白带，多态性条带占86．67％，蛋白带分子量范围为15．9KD～84．1KD。四种肉苁蓉都具有两条可溶性蛋白图谱共有条带，其分子量分别为29．4KD、23．2KD，其它1

3、3条带有不同程度的差异。分子量为21．5KD是沙苁蓉特有的条带、分子量为84．1KD是管花肉苁蓉特有的条带、分子量为17．5KD条带是盐苁蓉特有的条带、分子量为18．5KD是荒漠肉苁蓉特有的条带。3．利用LC．MS／MS液质联用的串联质谱和MASCOT检索蛋白质数据库，鉴定了各个种的特异蛋白带。沙苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出9个蛋白质，荒漠肉苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出15个蛋白质，盐生肉苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出26个蛋白质，管花肉苁蓉特异蛋白质条带共鉴定出20个蛋白质，其中有7未知蛋白(unknownprotein)或未命名蛋白(unnamedprotei

4、n)。沙苁蓉的特异蛋白大部分是与合成有关的酶；荒漠肉苁蓉的特异蛋白大部分是与抗逆311H匕量代谢有关的酶；管花肉苁蓉的特异蛋白大部分是与抗逆有关的酶和结构蛋白；盐生肉苁蓉的特异蛋白大部分是与信号传递有关的蛋白。4．研究了5个不同寄主的管花肉苁蓉可溶性蛋白SDS—PAGE电泳图谱，其多态性条带为77．78％，在胶上清晰的分析出9条带，分子量范围为14．8～87．0KD。分子量为46．5KD和29．6KD是5个材料共有的带，其它7条带有不同程度的差异。5．以8个经过航空搭载的荒漠肉苁蓉种子的M，代群体为研究材料，对8个材料的可溶性蛋白质进行SDS—PAGE分析

5、，8个材料的可溶性蛋白的SDS—PAGE图谱，在胶上清晰的分析出5条带，其多态性为80．00％，其分子量范围在31．9—65．3KD之间。如在分子量为45．5KD和31．9KD2条带是8个材料共有的带，其它3条带有不同程度的差异。对肉苁蓉属差异蛋白质组学的研究，可为其品质形成的分子机理和生理机理的研究奠定基础，也可以为肉苁蓉属种质鉴定、亲缘关系分析提供理论依据。关键词：肉苁蓉属，SDS．PAGE，质谱(LC．MS／MS)，差异蛋白质组Y鲞～’0AbstractThecharacteristicsofsoluble—proteinsfrom4specieso

6、fCistancheHoffing．etLinkwerestudiedbyapplyingtheproteometechniquestoanalyzethedifferentialproteinexpressionfiles．Theresultindicated：WeconstructandmodifiedtheSDS．PAGEelectrophoresismethodforsoluble—proteinsfrom4speciesofCistancheHoffing．etLink．Forsamplepreparation，themethodofsolubl

7、e—proteinsCistanche．Hoffing．etLinkwasextracted．TofindoutthedifferenceofdifferentialProteomicsofdifferentialspecies，weinvestigateddifferentialProteomicsofdifferentialspecies．theelectrophoreticcharacteristicsofsolubleproteinsfrom4speciesofCistancheHoffing．etLinkwerestudied，thediffer

8、entialproteometechniqueswasemploy