日本落叶松×长白落叶松无性系间生根差异的分子机制

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1、分类号Q943.2密级公开UDC学位论文日本落叶松×长白落叶松无性系间生根差异的分子机制MolecularMechanismofDifferentRootingCapacitybetweenTwoClonesofLarixleptolepis×Larixolgensis冯健指导教师姓名张守攻研究员申请学位级别博士专业名称林木遗传育种研究方向林木生物技术论文提交日期2008年5月论文答辩日期2008年6月学位授予日期2008年7月答辩委员会主席评阅人北京·中国林业科学研究院学位论文日本落叶松×长白落叶松无性系间生根差异的分子机制学位论文作者冯健指导教师姓名张守攻研究员指导小组成员齐力旺研究员

2、申请学位级别博士专业名称林木遗传育种研究方向林木生物技术论文答辩日期2008年6月中国·北京DissertationfortheDegreeMolecularMechanismofDifferentRootingCapacitybetweenTwoClonesofLarixleptolepis×LarixolgensisCandidate:FENGJianSupervisor:ZHANGShougongAssociateSupervisor:QILiwangAcademicDegreeAppliedfor:Ph.DSpeciality:GeneticsandBreedingofTreeDa

3、teofDefence:June,2008Degree-Conferring-Institution:ChineseAcademyofForestry匿名评阅论文论文编号中国林科院博士学位论文题目：日本落叶松×长白落叶松无性系间生根差异的分子机制EnglishTitle:MolecularMechanismofDifferentRootingCapacitybetweenTwoClonesofLarixleptolepis×Larixolgensis二级学科：（专业名称）林木遗传育种学位论文答辩预定日期：2008年6月20日通讯地址：北京颐和园后中国林科院研究生院，100091联系电话：0

4、10-62888546；传真：010-62888546电子邮址：yanghg@caf.ac.cn独创性声明本人声明所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得本研究生培养单位或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解中国林业科学研究院有关保留、使用学位论文的规定，中国林业科学研究院有权保留并向国家有关部门或机构送

5、交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权中国林业科学研究院可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）学位论文作者签名：导师签名：年月日年月日学位论文作者毕业联系方式工作单位：联系电话：电子邮件：通讯地址、邮编：摘要无性繁殖是现代林业发展的前提。扦插是林木无性繁殖的主要方式，优良品种进行良种繁育的关键是扦插生根技术。尤其是针叶树，扦插生根率低，是制约利用扦插进行无性系林业发展的瓶颈。迄今对扦插生根的研究虽然已在生理生化的水平上取得一定进展，但其生根相关的关键机理仍不清楚。随着分

6、子生物学技术的发展，从分子水平上探讨生根机理、分离生根相关基因及探讨这些基因的功能，进而揭示林木扦插生根机制，为利用基因工程育种手段改良林木提供科学依据，具有重要的科学意义和应用价值。本研究选生根率差异较大的2个落叶松全同胞无性系，取IBA处理后6h、不定根原基发生、不定根生长等不同根发育阶段的落叶松插穗基部为材料，利用抑制消减杂交技术构建了落叶松扦插生根过程差别表达cDNA文库。经过测序、DNASTAR软件序列拼接获得UniEST，并利用GenBank数据进行同源性比对；应用半定量PCR和实时定量PCR技术，进一步研究与分析IAAOL1、RGAOL等基因表达情况。通过简并引物技术，克隆部

7、分基因全长并应用DNASTAR软件构建进化树。主要结果如下：（1）落叶松扦插生根实验表明，落叶松插穗扦插后10d后部分长出愈伤组织，25d时可见不定根根原基，至80d后插穗根系基本形成，生根率在17.18%—90.63%之间。我们根据上述根发育过程，确定了本研究的取材时期为：经IBA处理后6小时、扦插后30d和扦插后50d。（2）成功构建了正、反2个差别表达cDNA文库，经测序和生物信息学分析，共获得521个UniEST