基于dna酶增敏微流控化学发光法在生物的分析中的应用研究

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1、浙江大学研究生学位论文独创性声明～～～～___』黝煅本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得逝垄盘芏或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：采丽考签字日期：幻阡年；月’『日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解堂鎏盘堂有权保留并向国家有关部门或机构送交本论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。本人授权堂鎏太堂可以将学位论文的全部或部分内容编入有

2、关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：，、——斗卜农嗣甫导师签名：签字日期：幻f午年≥月一了日签字日期：?柞年弓月7日浙江大学硕士学位论文致谢时光荏苒，岁月如梭，转眼间我近3年的研究生涯就要结束．这期间收获很多。首先，我要感谢我的导师沈宏老师。三年来，沈老师一直精心指导我，尽心尽力帮我解决实验上的困难，不论是最初亲自帮我搭建实验装置、科研选题，还是我的毕业论文。沈老师，科研态度严谨，做事认真、精益求精，学识渊博，脚踏实地的作风给我留下了深刻的印象。在沈老师的精心指导和严格要求下，我

3、学会了很多科研方法，分析问题解决问题的能力也有很大地提高。另外，沈老师，不急不躁、非常有耐心的性格也值得我好好学习。感谢姚波老师，谢谢您在订购DNA及使用PCR仪方面给我提供的大力帮助。感谢邬建敏老师，谢谢您在使用紫外分光光度计上给我提供的大力帮助。感谢给我提供帮助的化学实验中心的老师：王秋萍老师、徐锦仙老师、车海燕老师等。感谢在我进入课题组后给我很大帮助的程和勇师兄、宋小莉师姐、郝丽师姐、余雅玲师姐，特别是余雅玲师姐。感谢我的师弟邬期望，他来到实验室后，我的生活中多了很多欢声笑语。非常感谢林彩琴师姐，谢谢你在我的实验方面给我提供的指导。感谢我的室友，欧沙、陈燕、李青青、陈芬

4、芳、徐丽贤，你们和我一起分享生活中的喜怒哀乐，使我科研之外的生活丰富多彩．同时，感谢你们和我一起营造了温馨的寝室氛围，使我能够好好休息，安心科研。感谢微分所的同学，尤其是雍蓓蓓、胡媛媛、王巧红、刘香红、蒋艳、朱丽娜、林星宇等，谢谢你们在实验上给我提供的无偿援助。感谢我的爸爸妈妈，谢谢你们辛苦养育我，并一直理解我、支持我，谢谢你们对我的疼爱和无微不至的关怀。感谢我的男朋友吴振禹，谢谢你一直鼓励我、开导我，谢谢你一起与我分享快乐和忧伤。最后，感谢参加我论文评审和答辩会的各位专家、教授以及同学们!宋丽芳2014年1月浙江大学硕士学位论文摘要功能核酸(适配体、核酶、脱氧核酶和适配体核

5、酶)因其特异性的配体结合能力和多效的催化活性，近年来备受研究人员的关注。富含鸟嘌呤的寡核苷酸在某些离子的诱导下可发生结构变化，折叠形成G，四联体，再进一步结合血红素，可形成DNA酶。DNA酶是一种具有辣根过氧化物酶活性的功能核酸。微流控顺序注射法精度高、重现性好、试剂消耗量少、检测通量高，化学发光法灵敏度高、无需外加光源、线性范围宽，将微流控顺序注射和化学发光法联用能兼具二者优点，整套实验装置高效低耗、易于微型化，在生化分析领域的应用前景明确。本论文共分两章：第一章为绪论部分，着重综述了三类功能核酸及各自的主要作用。介绍了由钾离子诱导形成的DNA酶的构成、功能，基于DNA酶增

6、敏检测钾离子的方法，以及基于DNA酶扩增的信号放大技术。同时，对微流控顺序注射．化学发光法的联用技术进行了综述。第二章，开展基于DNA酶增敏的微流控化学发光法进行生物分析的研究。首先研究了DNA酶的合成，通过钾离子诱导富含鸟嘌呤的特定寡核苷酸形成G-N联体，然后结合血红素形成DNA酶；迸而研究利用该DNA酶的催化活性，构建微量钾离子的化学发光分析法，成功应用于真实人体血清中的钾离子含量分析。在此基础上，进一步研究基于目标分子触发的杂交链反应(HCR)扩增技术，在目标分子总量不变的前提下，通过自组装扩增DNA酶，大大提高了检测灵敏度，并探索应用于阿尔兹海默病基因诊断相关的单核苷

7、酸多态性研究。实验中，通过紫外可见光谱证明了G四联／$／血红素复合物的形成，优化了DNA酶的孵育条件；根据DNA酶的催化活性，挑选出了检测钾离子的寡核苷酸一AGR0100，进而优化了DNA酶催化化学发光的反应条件，发现储存于低温条件下的DNA酶具有较好的结构稳定性和长期的过氧化物酶催化活性。将该酶应用于人体血清中钾离子的检测，通过配对t检验进行了统计学分析，发现所建立的基于DNA酶增敏的微流控化学发光分析法与经典的电位分析方法无显著性差异，方法准确可靠。丌浙江大学硕士学位论文摘要在上述已构建的基于DNA