南极普里兹湾夏季海冰氨氧化菌多样性与丰度的分析

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1、原创性声明IIIlllrlFrrlrllJIlrlrlrrllIIIIIY2182577本人郑重声明:所呈交的学位论文,是本人在导师的指导下,独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外,本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体,均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名:笔垂§日期:勘f21皇:兰兰关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印

2、件和电子版,允许论文被查阅和借阅;本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名:曼熟导师签名:埤日期:皇红of夕:g硕_l:学位论文目录摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..:⋯⋯⋯lAbstract...........................................................3绪论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..51.1海

3、冰及海冰微生物⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.51.2海冰氮循环⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.71-3氨氧化菌研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.81.3.1氨氧化细菌研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯81.3.2氨氧化古菌研究进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..101.4分子生物学研究方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.111.4.1定性分析AOB的方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..111.4.2定量分析方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..121.5研究内容及意义⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..141.6创新点及试验难

4、点⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯15材料和方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..161样品采集⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.161.1采集地点及方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..161.2样品现场处理、固定和保藏⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.162理化性质分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯183细菌和古菌16SrRNA基因文库分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..183.1DNA抽提⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..183.2PCR反应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.193.3琼脂糖凝胶电泳⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯..193.4PCR产物纯化回收⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯k⋯⋯.203.5T载体连接与转化⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..203.6限制性内切酶片段长度多态性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯t⋯⋯.2l3.7序列分析及系统发育树构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.213.8OTUs丰度分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯214AOB多样性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.。225细菌和古菌amoA基因文库分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯226荧光原位杂交(FISH)计数⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯237定量PCR(QPCR)分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

6、⋯⋯..248相关性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..25试验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.26l理化性质⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.262细菌和古菌16SrRNA基因文库分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..272.1细菌以及古菌16SrRNA扩增结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.272.2细菌16SrRNA基因文库结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯282.3古菌基因文库结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯393.B—AOBl6SrRNA基因文库多样性结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.423.113一AOB16SrRNA基因P

7、CR扩增结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..423.2B—AOBl6SrRNA基因文库多样性结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..424.细菌和古菌amoA基因文库分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..46厶董力蓉硕t:学位论文4.1细菌amoA基因文库多样性结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯.464.2古菌amoA基因文库多样性结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..485荧光原位杂交(FISH)丰度分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯516.1DNA浓度⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..536.2扩增曲线⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..536.3数据结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

8、⋯⋯⋯⋯⋯.547相关性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯557.1各理化性质与丰度相关性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..557.2各理化性质与种系型数量相关性分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..57讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..591细菌和古菌16SrRNA基因文库分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯..591.1细菌16SrRNA基因文库分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯591.2古菌16SrRNA基因文库分析⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

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