一种harpin基因在转基因拟南芥中表达与体外使用harpin蛋白诱导植物防卫反应地研究

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1、鼬jJl生声明／煳聊本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者(需亲笔)签名：叩年乡月f加学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京农业大学可以将本学位论文的全部或

2、部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密口，在——年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密口。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者(需亲笔)签名：懈导师(需亲笔)签名童心矿日72月艿乙年^7，眺呷，，^v眇≥目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IABSTRACT⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IV文献综述第一章Harpin蛋白在植物上的生物学效应⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··1令Harpin的分子生物学特征◆Harpin在植物上的多种效应"0

3、-Harpin在植物细胞上的作用部位第二章植物韧皮部相关防卫对植物抗虫性的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··11夺韧皮部防卫反应和蚜虫趋避令植物在抗虫中的引发机制．◆胼胝质的生物学特性及功能研究报告第一章HpaGxoo转基因表达促进植物生长和抗病性⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·15◆转基因拟南芥的产生与鉴定-4HpaGxoo转基因表达提高拟南芥的发芽率并促进根的生长◆HpaGxoo转基因表达增强拟南芥对DC3000的抗病性夺HpaGX∞在转基因拟南芥中诱导防卫反应基因表达夺转基因拟南芥中表达的HpaGx。0的活性测定令转基因植株不发生过敏性细胞

4、死亡第二章HpaGxoo融合蛋白的表达、纯化抗体制备⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯_⋯⋯⋯”29◆HpaGxoD基因的扩增令pET30a(+)：：hpa瓯。重组表达载体的构建◆融合蛋白的表达及活性测定令融合蛋白的纯化与定量及其活性测定夺HpaGxoo抗血清制备及效价测定夺W醯ternblot分析第三章HrpNE。诱导甜瓜对蚜虫趋避作用⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··43◆甜瓜中AtPP2类似蛋白受HrpNEa诱导表达夺甜瓜中胼胝质的沉积受到HrpNEa的诱导夺刺探电位检测蚜虫在不同处理的甜瓜上的取食情况·◆HrpNm诱导甜瓜对蚜虫的趋避参考文献⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．53缩略语⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯59攻读硕士学位期间发表的论文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯··61致i射⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63摘要一种harpin基因在转基因拟南芥中表达及体外使用harpin蛋白诱导植物防卫反应的研究摘要Harpin是由革兰氏阴性植物病原细菌产生的一类蛋白类激发子，它们的共同特征是：富含甘氨酸，热稳定，对蛋白酶敏感，在寄主植物上产生致病性，在非寄主植物叶片上可以诱导Hypersensitiveresponse(HR)

6、或Hypersensitivecelldeath(HCD)。当外源使用harpin时，可以诱导多种植物抗病、抗虫、耐旱，并可促进植物生长，但是，对于harpin多重功能的分子机理，目前还不清楚，为深入研究harpin信号在植物体内传导的机制，选取了目前研究较多的由水稻白叶枯病菌Xanthomonasoryzaepv．oryzae的HpaGxoo和蔷薇科植物火疫病的病原细菌Erwiniaamylovora产生的HrpNEa作为研究对象，产生了表达HpaG‰的转基因拟南芥，并测定了转基因拟南芥的抗病防卫反应；同时，为了确定HrpNEa诱导

7、有益表型的广谱性，研究了HrpNEa在甜瓜上诱导蚜虫趋避效应。1．HpaGxo。在拟南芥中转基因表达促进植物生长和抗病性我们将编码HpaG轴的基因hpa@幻构建到pBll21双元载体上，通过真空花絮渗透法转入拟南芥，获得表达HpaGxoo的拟南芥(HpaGxoo—expressingArabidopsis，HEATl)转基因系。对转基因系进行了以下分子验证：通过PCR方法，确定了hpaG‰基因稳定整合在拟南芥基因组中；RT-PCR证明了hpaG渤基因在拟南芥中可以转录；从转基因拟南芥中提取的HpaGx∞蛋白能够在烟草上诱导HR；同时根

8、据SDS．PAGE电泳，明确了转基因拟南芥中表达的HpaGxoo蛋白的大小没有改变(15．6kD)。这些结果表明，hpa白渤基因在转基因拟南芥体内可以正常翻译为有活性的、完整的HpaGX∞分子．另外，我们对转基因拟南芥的