hlag基因上游调控区snp和重度子痫前期的相关性的研究 (1)

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1、原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：班掮日期：2010年5月20日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学

2、可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：碥钧日期：20lO年5月20日摘要子痫前期(preeclampsia，PE)是妊娠期特有的严重并发症，在我国发病率为9．4％，国外报道7％,--,12％。以妊娠20周后高血压、蛋白尿和水肿为特征，并伴有全身多系统损害，同时常伴有胎儿生长受限。该病严重影响母婴健康，是孕产妇和围生儿发病

3、及死亡的主要原因之一。。子痫前期的病因及发病机制至今尚未完全阐明，是国内外研究的焦点。目前公认可能与以下四种学说有关：遗传易感性、免疫适应不良、胎盘缺血、氧化应激反应。流行病学调查结果提示，遗传易感性及免疫适应不良可能相互影响，共同参与了子痫前期的发病。围绕这一中心思想，对引起移植排斥反应的最主要的人类白细胞抗原(humanleukocyteantigen，HLA)系统进行研究，筛选子痫前期的HLA系统易感基因位点，成为研究子痫前期的免疫遗传学发病机制的一条重要思路。HLA．G表达减少的机制可能与HLA．G基因5’上游调控区(5’-

4、upstream·regulatoreregion，5’-URR)单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphisms，SNP)相关。SNP是指存在于某一(些)群体、正常个体的基因组DNA中单个碱基的差异，是人类遗传信息多态性的本质表现。其具有数目多、分布广，相对稳定的存在于染色体上等特点。SNP的产生可能会引起蛋白质表型的改变，所以SNP也是影响人类体质的关键，使人可能特别易于或特别不易患上某些疾病。本研究从SNP角度研究重度子痫前期的基因背景，推测HLA．G基因上游调控区可能存在导致重度子痫前期发病的某(几

5、)个SNP易感位点，这些位点的碱基变化导致了HLA．G蛋白在母胎界面的表达发生变化，从而打破了母胎间的免疫耐受，导致重度子痫前期的发病。考虑到HLA—G在妊娠过程中的重要作用，及其作为一种可能诱导免疫耐受的分子在临床中的潜在应用价值，分析其表达影响因素将有助于深入了解HLA．G的分子生物学特性，并为临床实践提供有价值的信息。·目的本研究收集河南汉族重度子痫前期人群及正常妊娠妇女外周血，采取直接测序法计算HLA．G基因5'-URRSNP位点等位基因及基因型频率，比较各SNPl摘要在重度子痫前期组和正常妊娠组间的分布差异。从免疫遗传学角

6、度，分析研究HLA—G基因上游调控区SNP与重度子痫前期的关系，探讨HLA—G基因上游调控区表达调控的机制。材料与方法1研究对象重度子痫前期患者39例，平均年龄(31．17+5．97)岁，平均孕周(33．93+3．53)周；病人来自2008年10月至2009年3月郑州大学第三临床学院产科。重度子痫前期诊断标准参照乐杰主编《妇产科学》(第7版)。选取同期孕晚期正常足月妊娠妇女43例为对照组，平均年龄(29．82a：5．07)岁，平均孕周(38．87+1．01)周。两组孕妇孕前均无高血压、心脏病、肾病、肝病及糖尿病史，无输血及免疫治疗病

7、史。所有研究对象均随访至产后12周。本研究经我院伦理委员会审批通过并获得参与者的知情同意。2实验方法2．1标本采集于剖宫产术前采集重度子痫前期组孕妇和正常晚孕组孕妇肘静脉血2mL，以3．8％的枸橼酸钠抗凝，置．20℃冰箱保存备用。采集纳入者个人信息及病史资料，建立数据库。2．2基因组DNA的提取采用盐析法。将．20℃保存的抗凝全血在室温状态下逐渐溶解。取抗凝全血500p1于已灭菌的1．5m1Eppendorf管，加红细胞裂解液(本实验用三蒸水)900}tl，颠倒混匀，4000转／分离心1分钟，弃上清，重复以上步骤2．3次，直至沉淀层

8、无色。移去上清，加白细胞裂解液3701．tl(蛋白酶K终浓度为750ug／ml，SDS至终浓度为1．O％)，用振荡器将沉淀打碎，55℃水浴30分钟。待冷却至室温加100肛1饱和NaCl，充分混匀15秒，13，000转／分离心6分钟。将