elisa检测卵黄和血清中reov抗体相关性试验

《elisa检测卵黄和血清中reov抗体相关性试验》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、首届中国SPF禽类实验动物与兽用生物制品产业论坛酶标分析仪(DNM一9602型)，100—1000ul移液器及枪头，100ul移液器及枪头，0．5-300ul移液器及枪头，2．5ul移液器及枪头，O．5—10ul移液器及枪头，封口膜，2ml离心管，1．5ml离心管，移液槽，低温高速离心机(型号：SIGMA)，电热恒温水浴锅(型号：DK-98-1型)。2试验方法2．1REO抗体阴性SPF鸡对应种蛋卵黄直接稀释与氯仿处理样品不同稀释倍数EUSA检测对比选取经ELISA检测血清REO抗体阴性的SPF鸡收集的种蛋，采用直

2、接稀释卵黄和氯仿处理卵黄两种方法，对比分析二者与血清检测结果的一致性。直接稀释法采用将卵黄直接进行1：100、1：200、1：400稀释；氯仿抽提卵黄抗体方法151为：30001卵黄+600恤1生理盐水+900山氯仿，充分振荡后，37℃水浴30min，期间搅拌2-3次，然后4000r／min离心20min，取上层水相进行1：100、1：200、1：400稀释作为检品，分别按照ELISA检测试剂盒进行检测，对比分析样品S／P值与血清S／P值的差异。2．2REO抗体阳性鸡对应种蛋氯仿处理卵黄不同稀释倍数EUSA检测对

3、比选取经ELISA检测血清REO抗体阳性种鸡的种蛋，采用氯仿抽提卵黄抗体方法【5】，300ul卵黄+600p1生理盐水+900m氯仿，充分振荡后，37℃水浴30min，期间搅拌2—3次，然后4000r／min离心20rain，取上层水相进行1：100、1：200、1．'400稀释作为检品，分别按照ELISA检测试剂盒进行检测，对比分析不同稀释倍数样品S／P值与血清S／P值的差异。2．3大样本SPF和普通鸡血清和种蛋处理卵黄ELISA检测对比根据2．1、2．2确定的稀释倍数对SPF鸡和普通鸡采集的血清和种蛋卵黄进行

4、大批量样本检测，对比分析血清与卵黄检测SIP值及REO抗体判定的符合率。符合率计算公式：符合率=(与血清检测结果一致的鸡蛋份数，种蛋检测数)x100％3结果及分析3．1REO抗体阴性SPF鸡种蛋卵黄直接稀释与氯仿处理样品不同稀释倍数EIJSA检测结果选取5份血清REO抗体阴性的SPF种鸡及对应种蛋，分别采用水稀释法和氯仿抽提法提取卵黄抗体，并做1：100、l：200、1：400的倍比稀释进行ELISA检测，血清根据试剂盒要求做l：500稀释。检测S，P值见表1。裹lREO抗体阴性血清和2种卵黄处理方法不同稀释倍数

5、ELISA检测S／P值3．2REO抗体阳性种鸡对应种蛋氯仿处理卵黄不同稀释倍数ELISA检测结果选取21个阳性血清样本及对应卵黄，卵黄经氯仿处理后做1：100、1：200、1：400稀释，再次进行稀释度试验，S／P值结果见表2。首届中国SPF禽类实验动物与兽用生物制品产业论坛3．3大样本SPF和普通鸡血清和种蛋处理卵黄ELISA检测结果通过检测定期收集的SPF鸡血清、种蛋及普通鸡血清、种蛋，用上述确定的方法进行大批量样本检测，统计二者差异性，得出二者符合率。3．3．1SPF样本检测结果及分析见表3、表4、表5。表

6、3SPF样本第一轮检测SIP值首届中国SPF禽类实验动物与兽用生物制品产业论坛将表3、表4、表5中SPF鸡样本的检测数据，用spassl3．0软件进行分析，结果显示：血清和卵黄抗体检测结果差异不显著(P≥0．05)。3．3．2普通鸡样本检测结果及分析(随即抽取普通鸡103个样本)见表6、表7、表8、表9。表6普通鸡样本第一轮检涓SIP值表7普通鸡样本第二轮检测SIP值样品编号12345678首届中国SPF禽类实验动物与兽用生物制品产业论坛将表6、表7、表8、表9中普通鸡样本的检测数据，用spassl3．0软件进行

7、分析，结果显示：血清和卵黄抗体检测结果差异不显著(P≥0．05)。3．3．3SPF鸡样本及普通鸡样本检测结果综合分析见表10。表10符合率分析表卵黄抗体检测结果阳性阴性合计注：木表示血清和卵黄抗体检测结果相符的样本数。如表10所示，综合SPF鸡样本及普通鸡样本检测结果，相对于血清ELISA检测法，卵黄ELISA检测法的总符合率=(91+109)／206x100％=97．09％。3．3．4种蛋REOV卵黄抗体检测操作方法见表11。首届中国$PF禽类实验动物与兽用生物制品产业论坛4讨论REOV是6种主要经蛋传播疾病之

8、一，世界各地均有发生。有资料证明，养殖场蛋鸡发病率高达90％以上，可引发鸡多种疾病，包括病毒性关节炎，腱鞘炎、矮小综合症、呼吸道疾病、肠道疾病和所谓吸收不良综合征。经济损失常由病毒性关节炎／腱鞘炎和受害鸡增重减少、饲料转换下降等生产性能差引起【6】，给养禽业造成了极大的威胁。若生产疫苗用种蛋中含有此病毒，很有可能造成所产疫苗中含有REOV，免疫鸡只后，极易导致鸡只发病，给