种植体龈沟液中vegf浓度的检测分析

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1、山两医利人学坝卜学位论文近年来随着分子生物学和免疫学的发展，微生物学检查、龈沟液中细胞因子的检测及基因检测等已逐渐成为揭示疾病本质、探索疾病发病机制、判断预后和考核疗效的有效手段。鉴于免疫测定具有高度的特异性和敏感性，龈沟液中的微量物质(如、蛋白、酶、激素、药物等)也可用免疫学技术进行检测，酶联免疫吸附试验(Enzymelinkedimmunosorbentassay，ELISA)属于酶免疫测定范畴，在固相载体上包被抗原或抗体后，通过抗原抗体反应使酶标抗体或酶标抗原结合到载体上，经洗涤使结合的酶标抗体和有力的酶标抗体分离，沈去游离的

2、酶标抗体，加入底物显色，根据颜色深浅进行定量或定性分析，具有高度敏感性好特异性的特点。目前对于口腔疾病研究的方法中，从龈沟液中寻找病变标汜物是其重要的方法之一12引。龈沟液取样简便无创伤，又能重复采样，易为患者所接受，故目前对其成分的研究非常活跃，即保证了实验的可行性及结果的可靠性，又对疾病的诊断、治疗、评价、预后的发展又非常重要的意义。综上所述，由于种植体周围炎的进展会影响牙周组织的血管系统，龈沟液中VEGF在炎症组织中对血管新生和通透性加强起着重要作用，进而认为VEGF在龈沟液中的表达与种植体周组织炎症程度可能存在币相关关系，即

3、VEGF浓度在理论上有可能反映种植体周组织的炎症情况，然而关于种植体龈沟液中VEGF的水平和与临床指标相关性的研究尚未见报道，因此本研究采用ELISA双抗夹心法对40枚种植体周龈沟液的VEGF浓度进行检测，探讨VEGF与种植体周围炎的关系，初步探索VEGF是否有望成为种植体周破坏程度、验证活动性及严重性的关注指标，为确定其作为参与种植体周围炎症反应的成分持续进入病变组织提供一定的理论依据。～一坐堕堕型叁兰塑±兰篁丝苎实验材料与仪器1、ELISA检测VEGF试剂盒2、Whatman3#滤纸条3、酶联免疫检测仪4、隔水式电热恒温培养箱5

4、、游标卡尺6、超低温冰箱7、超净工作台8、TGL-16台式高速离心机北京四正柏生物科技有限公司英国Whatman公司SpectralII，奥地利常州国华电器有限公司温州三和量具仪器有限公司SANYO公司苏净集团安泰公司珠海Hema公司山两医利人学硕fj学位论文实验方法1病例的选择选择2011年4月前在山西医科大学第一附属医院口腔科完成XIVE系统柱状二段式种植体修复的患者30人，其中种植牙共40例(健康种植体28例、炎症种植体12例、天然对照牙40例)，其中女性11人，男性19人，平均年龄37．5岁。在2011年4月一6月问约至山西

5、医科大学第一临床医学院口腔修复科复诊。筛选患者时遵循以下标准：①无种植体周围组织疾病及牙周组织疾病治疗史；②无全身系统性疾病；③无吸烟史；④妇女未妊娠；⑤3个月内未使用抗生素及非箔体类药物；⑥种植义齿行使功能3个月以上；⑦无过高咬合2检测的临床指标①探诊深度(probingdepth，PD)-用牙周探针测量并记录待检牙齿的颊侧、舌侧的近中、远中四个点的探诊深度值。②龈沟出血指数(sulcttsbleedingindex，SBI)根据按《牙周病学》标准，检查并记录每个种植体、同名健康牙的龈沟出血指数。0=正常牙龈，探诊无出血：1-探诊

6、出血，龈乳头和边缘龈无水肿及颜色改变：2=探诊出血，龈乳头和边缘龈有颜色改变，无水肿；3=探诊出血，龈乳头和边缘龈颜色改变，轻度水肿；4=探诊后出血，龈乳头和边缘龈颜色改变，明显水肿；5=探诊出血，有自发出血和颜色改变及水肿。③以上临床检查均由同一名牙周医生完成，探渗使用Willams牙周探针。3I艋床分组标准①天然牙对照组牙周：周围龈袋探诊深度(PD)≤3mm，龈沟出血指数(SBI)<2。②健康的种植体周：周围龈袋探诊深度(PD)≤3mm，龈沟出血指数(SBI)<2。③炎症的种植体周：周围龈袋探诊深度(PD)>3mm，龈沟出血指数

7、(SBI)≥24操作方法4．1牙周情况的记录改良握笔式握持牙周探针，与牙齿长轴平行紧贴牙面提插方式有序移动进行探查，探诊力量约为20．259，做到既探测到实际深度又不致使患者疼痛和损伤。记录探诊深度并记I』』两医科大学坝lj学位论文录出血指数：探诊深度(PD)：用牙周探针测量并记录待检牙齿的近中唇(颊)乳头、『F中唇(颊)乳头、远中唇(颊)乳头和舌侧龈缘4个点的探诊深度值；龈沟出血指数(SBI)：观察牙龈颜色和形状并用牙周探针轻探龈沟，观察出血情况，并根据Mombelli等提出的记分方法(检查并记录每个种植体、同名健康牙的龈沟出血指

8、数。以上临床检查均由同一名牙周医生完成，探诊使用Willams牙周探针。4．2龈沟液的收集制备统一规格的滤纸条，将whatman3号滤纸裁成尺寸相等的宽2mm，长20ram的纸条，高温高压消毒后待用。用无菌干棉条擦干牙面，隔湿，将制备