细菌溶藻物质的初步分离生物质能利用项目cdm开发可行性分析

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1、⑨硕士学位论文MASTER’STHESIS(MicrocystisviridisNIES一102)和铜绿微囊藻(M．aeruginosaNⅢS．298)有很强的杀藻活力。但对大肠杆菌(EsChericlliacoliIAMl2119)、枯草杆菌(BacilluSsubtilisⅢ03027)、小球藻(ClllorellaⅦlg撕sL蝴C．27)无效果14】o(3)氨基酸K．Y，osbikawa等从海水中分离、筛选出具有抗蓝藻活性的细菌。在分离出的2594株细菌中，有37株能产生抗颤藻(oscillatoria锄pKb．ianNIES．361)的物

2、质。其中一株C979经鉴定为弧菌属，其产生的具有杀藻作用的生物活性物质为强亲水性化合物B．氰基．L．丙氨酸【l钔，该化合物可能是影响海洋藻类动力学的一个重要因素。(4)抗生素A．Dal【llama发现一株铜绿假单胞菌能释放低分子质量、热抗性物质，对供试的绿藻和蓝藻的生长有强烈的抑制作用。，经检测表明铜绿假单胞菌通过释放琼脂扩散性吩嗪色素对宿主藻类的生长起抑制作用【l¨。(5)含氮化合物S．B．Paul等研究发现分离的一株活性硝化细菌——节杆菌(A胡啪bactersp．)能抑制小球藻。该菌是通过氧化铵或其他还原性的氮化合物时释放的羟胺起作用。他还检

3、测到10mg／L的肟对小球藻也有抑制效果。(6)其他细菌杀藻物质随着藻类学、水生生态系统和环境科学研究的进展，溶藻细菌的杀藻物质被不断报道。L．Conllie等通过细菌的培养物滤液实验发现一株假交替单胞菌可分泌细胞外物质溶涮13】。K．H．Bal【er等发现某种假单胞菌T827／2B分泌一种高分子质量的热不稳定的化合物，该化合物能够杀死硅藻(111alaSsiosimpseudonana)‘10l。彭超等报道的葡萄球菌、芽孢杆菌、节球杆菌用O．22pm的滤膜过滤后，滤液仍有溶藻效果，说明这3株细菌均可能释放出某种物质溶藻【151。这些细菌杀藻物质

4、大都未被鉴定，溶藻机理仍不十分清楚。1．4实验的目的及意义本实验室在国内较早开展溶藻细菌的研究工作，目前已分离得到了多株具有溶藻活性的微生物，其中W5为一株高效的分泌溶藻物质的溶藻细菌，不但对于实验室培养的铜绿微囊藻具有强烈的溶藻活性，对于野生的铜绿微囊藻也具有良好的溶藻效果。因此，本实验的目的在于研究该溶藻活性物质的理化性质并进行活性物质的提取与分离，对进一步研究生物控藻有重要意义，且具有广阔的应用前景。4⑨硕士学位论文MASTER’STHESlS2材料与方法2．1材料2．1．1产气肠杆菌w5(Entembacteraemgenes)：为本实验

5、室分离并保存，储存于一70℃冰箱中。2．1．2铜绿微囊藻Ds藻液(Micmcystisaemginosa)：来自中科院水生生物研究所藻种保减中心，28℃恒温、2000lx光照培养，光暗比24：O。2．1．3培养基(1)基础柠檬酸(简称基柠)培养基(菌种培养基)成份质量or体积NH4H2P04K2HP04Na3CAMgS04·7H20单蒸水0．19O．19O．059O．029100ml表1：基柠培养基的主要成分(2)BGl1(藻液培养基)吲成份质量or体积NaN03MgS04。7H20NaEDTAA5NaC03K2HP04·3H20CaCl2·2H

6、20柠檬酸柠铁氨单蒸水表2：BGll的主要成分5砖吨眺Ⅲ抛雌撇懒慨一L似叭●∞OO仉仉K⑨硕士学位论文MASTER’STHESIS成份质量or体积H3803MnCl2·4H20ZnS04·7H20CuS04·5H20Na2M04·2H20单蒸水286mg181mg22mg7．9mg3．9mg100ml表3：A5的主要成分【9】2．1．4其他实验用品及试剂无水乙醇、甲醇、葡萄糖、蔗糖、淀粉、纤维素(棉花)、浓硫酸、a．萘酚牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G．250、磷酸、NaCl、KH2P04、钼酸铵、抗坏血酸、蛋白酶K、DN嬲eI、NaHC03溶液、ED

7、TA；透析袋(8～10l①)。2．1．5仪器(1)离心机：德国he脚ceUD．37520osterode(2)旋转蒸发仪：国产RE．52(3)恒温水浴锅：国产HH．S数显恒温水浴锅(4)高压灭菌锅：同本H球AYAMAHVE．50(5)振荡器：国产wH．2微型旋涡混合仪(6)电子天平：德国赛多利斯PL203(7)振荡培养箱：国产HZQ．C空气浴振荡器(8)烘箱：国产DGX一9053B．1电热鼓风干燥箱(9)分光光度计：日本岛津Uv一240l(PC)⑩超净工作台：国产DL．CJ．1F医用型洁净工作台QD自动磁力搅拌器2．2方法2．2．1W5溶藻细菌菌

8、体和菌体上清的溶藻效果试验(1)将W5菌种接种至基柠培养基中(分装成5瓶)，于34℃，197印m条件下振荡培养12小时后，取出培养液，留