棉花病毒诱导的基因沉默体系的建立与其在棉花抗黄萎病中的应用

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1、棉花病毒诱导的基因沉默体系的建立及其在棉花抗黄萎病中的应用Semi-quantitativeRT-PCRfoundthattheGhMAPKandGhMAPKKKweresignificantlyreducedtwoweeksafterinjectionthusvenfyingtheefficiencyofgenesilencinginmolecularlevel．KEYWORDS：Gossypiumhirsutum；VerticiUiumwilt；Verticilliumdahlia；MAPKsignaltr

2、ansductionpathway；virus—inducedgenesilience(ViGs)IV缩略词表AmpAmpicillinBLASTBasicLocalAlignmentSearchToolbpcDNACTABDEPCDNaseIEDTAIPTGBasepairComplementaryDNA氨苄青霉素BLAST碱基对互补脱氧核糖核酸CetyltrimethylammoniumBromide十六烷基三甲基溴化铵DiethylPyrocarbonateDeoxyribonucleaseIEthyle

3、nediaminetetraaceticacidIsoprol一13一D-thiogalactopy-ranowideLBLuria-BertaniculturemediummRNAMessengerRNANCBINationalCenterforBiotechnologyInformation0RFPCRKanRNaseRpmOpenreadingframePolymerasechainreactionKanamycinIUbonucleaseRevolutionsperminuteDMSODimethyls

4、ulfoxideTrisTris(hydroxymethyl)aminomethaneV焦碳酸二乙酯脱氧核糖核酸酶I乙二胺四乙酸异丙基．p-D一硫代半乳糖苷LB培养基信使核糖核酸美国国家生物技术信息中心开放读码框聚合酶链式反应卡那霉素核糖核酸酶转速二甲基亚砜三羟甲基氨基甲烷第一部分文献综述第一章大丽轮枝菌与棉花的互作机制1棉花黄萎病棉花黄萎病是世界性分布的一种为害棉花的重要病害。自1914年Carpenter首次在美国弗吉尼亚发现棉花黄萎病以来，这一病害已遍布美国，巴西，印度，和中国。(沈其益，1992；Bel

5、letal，1992)。1935年我国由于引进美国棉花品种而传入棉花黄萎病，且先后在陕西径阳、山西运城、河南安阳和山东高密等地发生。70年代以后，已有主要分布在黄河流域棉区12个省发生黄萎病。进入90年代后，黄萎病的发展有明显加重的趋势，病害范围也日益扩大。1993年是我国发现黄萎病以来发病最重的一年，这一年暴发成灾，遍及各主产棉区，发病总面积达270万公顷(顾本康，马存，1996；石磊岩等，1997；宋晓轩等，1997)。近几年来，黄萎病在我国南北方棉区发展迅速蔓延，病害造成的损失也在逐年加重，成为阻碍棉花产

6、量和品质的一大突出问题。1．1症状棉花黄萎病是由大丽轮枝菌感染引起的维管束病害，被称为“棉花的癌症”。发病的主要症状为叶片边缘稍向上卷曲，叶脉间产生淡黄色不规则的斑块，叶脉附近仍保持绿色，呈掌状花斑，类似花西瓜皮状；有时叶片叶片叶脉问出现紫红色失水萎蔫不规则的斑块，斑块逐渐扩大，变成褐色枯斑，甚至整个叶片枯焦，脱落成光杆；劈开茎杆或叶柄，可见维管束变成黄褐色。1．2发病规律温度和湿度是关系到棉花黄萎病发病的主要原因。病菌从植物根部伤口侵入，也可以从嫩根表皮特别是根尖非角质化部分或下胚轴侵入，经皮层进入导管，随液

7、流向上扩展到全株，引起全株发病。温度和湿度是关系到棉花黄萎病发病的主要原因，黄萎病发病最适温度为25～28℃，低于25"C或高于30℃发病缓慢，超过35"C既有隐症现象。长江流域的棉区，∞7月份时温度、湿度都适宜，是棉花黄萎病发生的高峰期：8月份温度偏高，病情发展减缓；9月份温度降低且降水较多，第二个发病的高峰期。棉花病毒诱导的基因沉默体系的建立及其在棉花抗黄萎病中的应用发病高峰越早，危害越大损失越重。2病原菌黄萎病病原菌属半知菌亚门(Deutermycotina)淡色菌(Mmonilaceae)轮枝菌属(Ve

8、rticillium)。引起棉花致病的主要有两种：黑白轮枝菌(Verticilliumalbo．a护um)和大丽轮枝菌(Verticilliumdehliae)。黄萎病菌本身有较强的变异性，再加上生态环境的不同，常常会产生新的致病类型。我国主要棉区的致病菌均属于大丽轮枝菌。两者的区别为：大丽轮枝菌产生微菌核。不同的大丽轮枝菌系，在PDA培养基上产生的微菌核在形态、大小、数量、形成快慢及