硫氧还蛋白还原酶表达上调治疗非酒精性脂肪性肝病的实验研究

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1、山西医科大学硕士学位论文硫氧还蛋白还原酶表达上调治疗非酒精性脂肪性肝病的实验研究摘要研究背景：非酒精性脂肪性肝病(nonalcoholicfatty1iverdisease，NAFLD)，是一组以肝细胞脂肪变性、坏死、炎性细胞浸润等为主要特征的临床病理综合征，其肝脏组织学病变与酒精性肝病相类似，但无过量饮酒史。根据病理学改变分为单纯性脂肪肝(NASFL)、脂肪性肝炎(NASH)、脂肪性肝纤维化并且可逐渐进展为肝硬化、肝癌等终末期肝病，已成为目前仅次于慢性病毒性肝炎和酒精性肝病的重要肝硬化前期病变。NAFLD

2、患者常伴随肥胖、脂代谢紊乱、高血压和糖代谢异常等代谢综合征(MS)的主要组分，因此被认为是代谢综合征的肝脏表现。流行病学显示，NAFLD在世界各地均有发病，令人担忧的是，随着肥胖病的流行，儿童和青少年肥胖逐渐增加，甚至很大一部分病人既没有肥胖也没有糖尿病，表明NAFLD的患病率将显著上升，严重危害人民健康，已成为一个重要的公共健康问题和社会问题，但至今尚未找到有效的治疗手段。因此探讨其发病机制，寻求有效治疗具有十分积极的社会意义。目的：非酒精性脂肪性肝病发病率不断攀高且起病渐趋低龄化，其发病机制尚不明确，临

3、床上仍缺乏有效的治疗手段。目前认为脂肪代谢障碍使肝脏脂肪内环境失衡是肝脂肪变性的基础，而氧化应激被认为是肝脏脂肪变发展为脂肪性肝炎的催化剂。氧应激使机体产生大量的反应性氧化物(ROS)，当其产生超过机体的抗氧化系统的清除能力或细胞中保护体系的功能降低，就会造成大分子损伤和包括凋亡在内的病理变化。体内抗氧化物质的减少或缺乏使活性氧灭活障碍，而又加强了氧化应激。氧化／抗氧化失衡是造成NAFLD发生发展的重要原因。硫氧还蛋白还原酶(thioredoxinreductase，TrxR)是一种具有抗氧化作用的含硒酶，

4、其活性与硒的含量密切相关。据报道，肝炎、肝硬化患者的TrxR活性均低于正常人。mR对高脂诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)疗效的研究少见报道。本实验采用高脂胆固醇饮食建立非酒精性脂肪肝大鼠模型，观察大鼠肝组织中TrxR活性和基因的表达情况，对TⅨR在NAFLD发病机理中的作用进行初步探讨，同时观察降脂益肝冲剂和亚硒酸钠对肝组织TrxR活性和基因表达的影响，探讨其可能的分子治疗机制，为临床应用提供实验依据。方法：1．动物模型的建立及标本的采集：60只雄性Wistar大鼠正常喂养一周后，随机分为J下常对照组

5、(N组)：给予正常饲料：模型对照组(M组)，用药组(D组)，补硒组(X组)：给予高脂饲料(85％普通饲料，13％的猪油和2％的胆固醇)，N组和M组每组20只，D组和X组每组10只大鼠。实验设8、13周两个时相点，N组和M组每个时点10只大鼠，相对应的组别为N1、N2，M1、M2；于实验第8周末将N1组和M1组大鼠处死，以观山西医科大学硕士学位论文D组和x组每组10只大鼠。实验设8、13周两个时相点，N组和M组每个时点10只大鼠，相对应的组别为N1、N2，M1、M2；于实验第8周末将N1组和M1组大鼠处死，以

6、观察造模情况，同时D组和X组则分别给予降脂益肝冲剂lml／1009，以0．8∥ml的浓度和亚硒酸钠lml／1009，私g／ml的浓度溶解灌胃，每日两次，N2组和M2组大鼠则分别给予等量的生活饮用水灌胃，每同两次，共持续5W。实验第13周末处死剩余各组大鼠，自腹主动脉采血，迅速取出肝脏，按常规制备血清、肝匀浆以及肝组织切片，并留取少量肝组织于．70℃低温保存。2．检测指标：测体重、体长、肝脾湿重，并计算肝指数(肝湿重／体重x100％)、Lee’S指数(体重033／体长x1000)及肝脾比值(肝湿重／脾湿重)等

7、体质指标；全自动生化分析仪测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、血脂及肝组织脂质含量，葡萄糖氧化酶法测定空腹血糖(FBG)，铜染色法测定血清和肝组织游离脂肪酸(n1A)水平，放免法测定血清空腹胰岛素(FINS)和肿瘤坏死因子(耵师．a)水平，计算胰岛素敏感指数(ISl=ln(1／(FINSxFBG)))；黄嘌呤氧化酶法测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)活性；硫代巴比妥酸法测定肝组织丙二醛(MDA)含量；NADPH偶联法测定肝组织谷光甘肽过氧化物酶(GSH．Px)活性，DTNB法测定肝组织硫氧

8、还蛋白还原酶(TⅨR)活性；光镜下评估脂肪变性和炎症活动情况；逆转录聚合酶链反应(R■PCR)测定肝组织TrxRmRNA的表达。结果：1．N组大鼠肝小叶结构完整，肝索围绕中央静脉呈放射状分布，细胞呈多边形，大小较一致；各项生化指标均在正常范围；硫氧还蛋白还原酶mRNA表达较强。2．8周末，与对照组N1组相比，模型组M1组大鼠出现了明显的脂质代谢紊乱，伴随高胰岛素血症和胰岛素抵抗；肝组织出现了轻到中度脂肪变，且无炎