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《GBT5413.16-1997-_婴幼儿配方食品和乳粉叶酸(叶酸盐活性)的测定.pdf》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在行业资料-天天文库。
1、GB/T5413.16-1997前言本标准等效采用美国公职分析化学师协会(AOAC)方法。本系列标准从实施之日起,代替GB5413-85,本标准由中国轻工总会提出。本标准由全国乳品标准化中心归口。本标准负责起草单位:国家乳制品质量监督检验中心。本标准参加起草单位:卫生部食品卫生监督检验所、浙江省轻工业研究所、哈尔滨森永乳品有限公司、雀巢(中国)投资服务有限公司。本标准主要起草人:殷晓红、王芸、杨金宝、张玉杰。中华人民共和国国家标准婴幼儿配方食品和乳粉GB/T5413.16-1997叶酸(叶酸盐活性)的测定代替GB5413-85Milkp
2、owderandformulafoodsforinfantandyoungchildren-Determinationoffolicacid(foiateactivity)1范围本标准规定了用微生物法测定叶酸(叶酸盐活性)的方法。本标准适用于婴幼儿配方食品和乳粉中叶酸(叶酸盐活性)的测定。2方法原理叶酸盐的活性通过干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei)的生长情况来评价。3试荆、菌种和培并基所有试剂,如未注明规格,均指分析纯;所有实验用水,如未注明其他要求,均指三级水。3.1鸡胰腺:称取100mg干燥的鸡腆腺,加20mL蒸馏水
3、,搅拌15min,离心lOmin(3000r/min),取上清液用。现用现配。3.2生理盐水:称。.9g抓化钠(分析纯)于100mL容量瓶中,稀释至刻度,振荡溶解。分装lOmL到每个培养管中,盖上盖,121℃灭菌20min,每周准备一次。3.3磷酸缓冲液:c(H,PO,)为。.05mol/L,含有抗坏血酸。溶解50mg抗坏血酸于loomLO.05mo1/L磷酸缓冲液中,现用现配。3.4叶酸,标准品。3.5浓氨水。36甲苯。3.7菌种:干酪乳杆菌(Lactobacilluscasei).8培养基。3.8.1乳酸杆菌琼脂培养基:陈化乳15g
4、,醉母浸膏5g,葡萄糖log,番茄汁100mL,磷酸二氢钾2g,聚Ll1梨糖单油酸醋1g,琼脂log,加燕馏水至1000mL,pH6.8士0.2(250C),3.8.2乳酸杆菌肉汤培养基:陈化乳15g,酵母浸膏5g,葡萄搪log,番茄汁l00mL,磷酸二氢钾2g,聚山梨搪单油酸醋lg,加燕馏水至lOOmL,pH6.8士0.2(25-C),3.8.3叶酸测定用培养基:酪蛋白陈log,葡萄糖40g,乙酸钠40g,磷酸氢二钾1g,磷酸二氢御1g,DL-色氨酸0.2g,L一天门冬氨酸0.6g,L一半肤氨酸盐酸盐。.5g,硫酸腺嗦吟10mg,盐酸
5、鸟嗦吟10mg,尿啼吮10mg.黄嗦吟20mg,聚山梨搪0.1g,谷光甘肤5mg,硫酸镁0.4g,氯化钠20mg,硫酸亚铁20mg,硫酸锰15mg,核黄素lmg,p-氨基苯甲酸2mg,维生素B64mg,盐酸硫胺素400pg,泛酸钙800pg,烟酸800fag,生物素20pg,加燕馏水至1000mL,pH6.7士0.1(250C),3.9氢氧化钠溶液:c(NaOH)为0.lmol/L,国家技术监,局1997一05一28批准1998一09一01实施cs/T5413.16-19974仪器常用实验室仪器及4.1培养箱。4.2灭菌釜。4.3培养管
6、和帽。4.4试管振荡架。4.5接种针和接种环。4.6pH计。4.了离心机。制备5.1菌种的制备5.1.菌种植物乳杆菌(Lactobacilluscasei)从菌种培养基上接种到三个转接培养墓试管中,370C培养24h,每月接种一次,标好,贮于冰箱中。再以每月接种的培养管(4.3)的一支中再接种1支转接培养基,37℃培养24h,每周做一次这样的转接,每周从接种管中接种4^-5支转接培养基接种管,37℃培24h,标好,作为每日测定用。每月月初从月接种管中重新接种3个转接管保存新菌种。5.1.2从日接种管中接种一管于菌种培养基中,37℃培养2
7、4h。在无菌条件下离心该培养液1Omin(2000r/min),倾去上清液,再用lOmL生理盐水(3.2)将细菌细胞清洗,再离心lOmin(2000r/min),倾去上清液,再用另外的10mL生理盐水(3.2)清洗。如前面一样离心,弃去上清液,再加lOmL生理盐水0.2)。吸1mL该菌悬液于lOmL生理盐水(3.2)中,混合均匀。标准溶液的制备:一:.,标准贮备液,叶酸的浓度500yg/mL,精确称取55-56mg叶酸标准品(3.4),用50mL蒸馏水定量地转人100mL容量瓶中,加2mL氨水(3.5),溶掖制备后,计算溶液的体积,要求
8、贮备液中叶酸盐的浓度为500pg/mL;X1000X贮备液体积(mL)100X500或简化为贮备液体积(mL)_m_5X0式中:,—标样的质量,mg;c—标样的纯度,g/l00g,用燕馏水稀释溶液至刻度,用