GBT4143-1984-牛冷冻精液.pdf

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1、GB4143—84牛冷冻精液Frozensemenofbovine1984-01-271984-09-01中华人民共和国国家标准牛冷冻精液GB4143—84Frozensemenofbovine本标准适用于奶牛、兼用牛、肉牛和黄牛的冷冻精液产品。1规格与质量1.1剂型细管、颗粒和安瓿。1.2剂量a.细管：中型0.5毫升；微型0.25毫升。b.颗粒0.1±0.01毫升。c.安瓿0.5毫升。1.3精子活力解冻后活力，指呈直线前进运动的精子百分率（下限）30％（即0.3）；精子复苏率（下限）50％。1.4每一剂量解冻后呈直线前

2、进运动的精子数细管：每支（下限）1000万个。颗粒：每粒（下限）1200万个。安瓿：每支（下限）1500万个。1.5解冻后的精子畸形率（上限）20％。1.6解冻后的精子顶体完整率（下限）40％。1.7解冻后的精液无病原性微生物，每毫升中细菌菌落数（上限）1000个。1.8解冻后的精子存活时间在5～8℃贮存时（下限）为12小时；在37℃贮存时（下限）4小时。牛冷冻精液（以下简称“冻精”），必须符合上述各项指标。否则，不得使用。2制作程序2.1采精2.1.1种公牛的质量用于制作冻精的种公牛，其体型外貌和生产性能，均应合乎本品

3、种的种用公牛特等、一等标准。在目前尚未建立国营种畜后裔测定站的地区，主力公牛必须经过种畜繁育场，进行后裔测定，由省、市、自治区级畜牧科研部门把关。未经后裔测定的种公牛的冻精，必须经过上级主管部门审批，严格控制使用。2.1.2种公牛的体质种公牛必须体质健壮，新引进的公牛，应在隔离场所经过检疫。种公牛须经正式兽医机构和兽医师证明，无下列传染病者，如牛肺疫、布鲁氏杆菌病、牛结核病、牛副结核病、牛白血病、钩端螺旋体病、传染性鼻气管炎、病毒性腹泻病、胎儿弧菌病和阴道滴虫症等。才允许使用。上述各种疫病的检查方法，可按中华人民共和国农

4、牧渔业部颁布的有关规定执行。2.1.3成年种公牛每周可采精两次；每次也可根据具体情况和需要，连续排精两回。采精前，应先用温水清洗公牛阴筒和包皮，然后再用灭菌生理盐水冲洗干净。2.1.4种公牛的新鲜精液，应符合下列质量标准。不具备其中任何一项者，不得用于制作冻精。a.新鲜精液的色泽应呈乳白稍带黄色。b.直线前进运动精子（下限）60％。c.精子密度每毫升（下限）6.0亿。d.精子畸形率（上限）15％。2.2精液的稀释2.2.1稀释保护剂的配制2.2.1.1配制冻精用的稀释保护剂，必须用新鲜的双重蒸馏水和卵黄，二级品以上的化学

5、试剂。2.2.1.2所用器具，必须达到牛冷冻精液人工授精技术操作规程的标准，保证清洁、无菌。2.2.1.3推荐下列配方，作为冻精用稀释保护剂a.细管用：第一液蒸馏水100毫升，柠檬酸钠2.97克，卵黄10毫升。第二液取第一液41.75毫升，加入果糖2.5克，甘油7毫升。脱脂奶82毫升，卵黄10毫升，甘油8毫升。b.颗粒用：12％蔗糖液75毫升，卵黄20毫升，甘油5毫升。12％乳糖液75毫升，卵黄20毫升，甘油5毫升。2.9％柠檬酸钠液73毫升，卵黄20毫升，甘油7毫升。c.安瓿用：可参照以上各配方酌情使用。上述各类稀释保

6、护剂，在每100毫升中，应加青霉素、链霉素各5～10万单位。稀释保护剂要现配现用；亦可配后放入4～5℃冰箱中备用，但不应超过一周。2.2.2稀释比例不做具体规定，但必须保证每一剂量（细管、颗粒、安瓿）中，解冻后所含直线前进运动精子数的规定。2.3降温和平衡（预冷）稀释后的精液，采用逐渐降温法。在1～1.5小时内，使稀释精液的温度降到4～5℃；然后再在同温的恒温容器内平衡2～4小时。2.4冷冻2.4.1制备冻精的操作室，应符合牛人工授精技术操作规程。2.4.2冻精的器具2.4.2.1细管冻精，应采用与细管配套的器具进行。2

7、.4.2.2颗粒冻精，采用聚四氟乙烯板（简称氟板）、铜纱网、尼龙网或铝板均可。2.4.2.3安瓿冻精，采用净容量为0.5毫升的硅酸盐中性玻璃安瓿。以上各种用具，在冻精时，精液容器与液氮面的距离，一般保持1～1.5厘米，初冻温度-80～-120℃。精液在冷冻前，应充分混匀，并检查精子活力。细管精液，不论是用聚乙烯醇封口、钢珠封口，还是超声波塑料热合，都必须将口封严。颗粒精液，每毫升稀释精液，滴冻10±1粒，滴管应事先预冷。操作要准确、规整，每冻完一头公牛精液之后，必须更换滴管、氟板等用具。安瓿精液，用酒精喷灯火焰封口。在制

8、作冻精时，不论是细管、颗粒和安瓿，均应始终注意防止精液温度回升。每冻完一批（头）精液，应立即放入液氮中浸泡，然后计数，取样检查和包装。3检查方法3.1精子活力检查3.1.1颗粒冻精，应先取2.9％二水柠檬酸钠液1～1.5毫升，加温到38±2℃，投放冻精一粒，轻轻摇荡，使之迅速溶化，用压片法，立即在显微镜下检查。3.1