基于有害赤潮消控的抑藻功能微生物资源的挖掘与研究

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1、致谢本论文是在厦门大学生命科学院应用与环境微生物研究所完成的。博士生学习生活令我难以忘怀，老师的谆谆教导、家人的深深关切以及同学朋友们的热情帮助，使我最终能顺利完成学业。本论文有幸得到郑天凌教授的悉心指导，郑老师渊博的学识、严谨的科学态度使我受益非浅。郑老师在学术研究上是我的楷模，在为人处世上也是我的典范。我衷心感谢郑老师在学业和生活上给予的无微不至的关怀和帮助。本论文得以顺利完成，期问得到了很多老师和同学的热心帮助。感谢生命科学院高亚辉老师、黄耀坚老师、胡忠老师、田蕴老师和环境科学研究中心的焦念志老师、黄邦钦老师、王大志老师等在实验

2、设计和论文撰写中提出的宝贵意见；感谢学院211实验室老师们对实验工作的大力支持。本论文的样品是在海上获得的，特此感谢朱明远教授、李瑞香教授在现场航次中对我的照顾和帮助。感谢齐雨藻教授提供实验用的塔玛亚历山大藻和球形棕囊藻，感谢973项目第一课题组的高亚辉教授、吕颂辉教授提供东海原甲藻，感谢集美大学周立红副教授提供实验用的其它藻种。感谢环境科学研究中心的唐晓达同学帮助我完成Biolog测试；特别感谢我们实验室的杨小茹同学，她协助我完成了大部分的实验工作，感谢刘慧杰、雷欢同学协助我完成部分实验，感谢王新、蒋云霞同学帮助带回实验用的样品，感

3、谢实验室的其它同学在实验工作及论文写作中的关心和帮助，他们营造了一个活跃的学术气氛，轻松的生活环境，和他们在一起，我很开心。感谢我的父母、姐姐和妻子，你们的爱是我宝贵的财富。本论文的顺利完成，得到了国家重点基础研究规划(973项目)“我国近海有害赤潮发生的生态学、海洋学机制及预测防治”(2001cB409700)、国家自然科学基金面上项目“海洋抑藻基因的高效筛选及其在赤潮调控中的应用”(30370276)和高等学校博士点专项基金“厦门海域微生物生态过程及其调控赤潮藻生长作用”(20050383002)的资助。在此表示深深的感谢!苏建强

4、2006年9月厦门大学学位论文原创性声明兹呈交的学位论文，是本人在导师指导下独立完成的研究成果。本人在论文写作中参考的其他个人或集体的研究成果，均在文中以明确方式标明。本人依法享有和承担由此论文产生的权利和责任。声明人(签名)：遗，。菱冶励年，，月呷日厦门大学学位论文著作权使用声鳃本人完全了孵厦门大学有关傈整、使用学位论文的规定。厦门大学有权保留并向国家主管部门或箕指定机构送交论文的纸质版和电子版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复制并允许论文进入学校图书馆被查阅，有权将学位论文的内容编入有关数据库进行检索，有权将学位论文的标题和摘

5、要汇编出版。保密的学彼论文在解密后适震本觌定。本学位论文属于1、保密()，在年鳃密籍适用本授权书。2、不保密(0(请在戮上提疲括号痨封“4”)鬈稚导师签名：。V{名l。弦l日期：聊6年t7月哆日日期：力啼怎年，≯月f日基于有害赤潮消控的抑藻功能微生物资源的挖掘与研究摘要赤潮是一种严重的全球性海洋灾害，近年来赤潮发生次数增多，发生区域扩大，赤潮危害加剧。海洋细菌由于其本身的种群多样性、生理生化多样性、生态功能多样性、遗传特征多样性等特点以及同赤潮藻错综复杂的生态关系，在赤潮生消过程中有着极其重要的作用；而近年来细菌杀藻现象的发现为微生物

6、防治赤潮提供了可能途径，从而菌藻关系研究已经成为当前赤潮研究的重点和热点。本论文研究了一株有毒甲藻——塔玛亚历山大藻培养液细菌群落组成；改良了藻培养液除菌技术；从东海赤潮区分离并筛选到几株能杀死塔玛亚历山大藻的海洋细菌，研究了细菌杀藻的方式；构建了东海赤潮区海水、沉积物样品和红树林区沉积物样品的小片段基因组文库，并进行抑藻克隆子的筛选；获得的主要结果如下：1．构建了塔玛亚历山大藻培养液中的细菌16SrDNA文库，研究其细菌群落组成。RFLP分析表明文库中的克隆子分为13个谱型，分别对各谱型代表克隆予序列分析，结果表明塔玛亚历山大藻培养

7、液中细菌分属于12属，主要为变形细菌(61．5％)，其中y-Proteobactefia占30．8％，日t-Proteobacteria占23．1％，[3-Proteobactcria占7．6％；拟杆菌门(Bacteroidetes，23．1％)细菌和放线菌门(Actinobacteria，7．6％)细菌。2．有效的改良了塔玛亚历山大藻培养液除菌技术。通过对塔玛皿历山大藻重复洗涤、溶菌酶／SDS处理和抗生素处理，尝试除去了塔玛亚历山大藻培养液中的细菌。通过细菌培养、荧光显微镜观察以及16SrDNA扩增等方法对处理后的藻培养液进行无菌检

8、验，结果均表明没有细菌的存在；同时，我们连续监测了整个生长周期及其后的连续三代培养物，同样也未检测到细菌。这样我们成功的获得了一株无菌的塔玛亚历山大藻培养液。该法较为有效且耗时较少，获得的无菌塔玛亚历山大藻可以在实验室基