pte患者吞噬细胞与nk细胞相关基因mrna差异性表达的意义

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1、摘要背景静脉血栓栓塞症(venousthromboembolism，VTE)是一种环境和／或遗传因素参与的常见病、多发病。近年，有学者提出炎症免疫反应在VTE的发病机制中可能发挥重要作用。吞噬细胞及NK细胞作为重要的非特异性免疫细胞及炎症因子的效应细胞，其在炎症及免疫调节中的作用逐渐引起研究者的兴趣。目的应用人类全基因组表达谱芯片技术检测吞噬细胞及NK细胞相关基因mRNA在PTE中的表达水平，探讨两者在PTE中可能的作用。方法随机收集20例P1飞患者及20例性别、年龄与之匹配的对照者，抽取外周血单个核细胞总RNA，合成Cy

2、3标记的P1rE组和对照组的cRNA探针，与Agilent人类全基因组oligo芯片杂交。杂交后进行图像扫描，并使用GeneSpringGX数据分析软件对基因芯片原始信号值进行荧光、背景、标准化参数设定及稳健多芯片平均标准化分析处理。将PTE组与对照组标准化基因信号强度采用两类样本比较随机方差参数T检验，筛选吞噬细胞及NK细胞相关基因mRNA表达信息，显著差异基因筛选标准为p<0．05。采用FQ．PCR对部分基因的芯片检测结果进行检测以验证基因芯片的可靠性。结果检测出吞噬细胞相关基因mRNA表达条带8条(CDlla、CDl

3、4、CDl6b、CD32a、CD32b、CD35、MRC2、SCRABl)，且PTE组mRNA表达均高于对照组，差异有统计学意义(P<0．05)。检测出NK细胞相关基因mRNA片段18条：与对照组相比，盯E组杀伤细胞凝集素样受体(KLR)、杀伤细胞免疫球蛋白样受体(ⅪR)及自然细胞毒受体(NCR)mRNA表达呈下调趋势，KIRmRNA表达差异无统计学意义(P>O．05)；KLR中KLRC2、KLRC4mRNA表达呈下调趋势，但差异无统计学意义(P>0．05)；KLRBl、KLRCl、KLRC3、KLRDl、KLRFl、KL

4、RGl、KLRKlmRNA表达下调，差异有统计学意义(P0．05)。结论P1E组吞噬细胞表面受体mRNA显著高于对照组，提示其功能异常活化；NK细胞表面受体mRNA下调，提示NK细胞的自然杀伤功能受抑制：炎症与PTE相关。关键词静脉血栓栓塞症，肺血栓栓塞症，基因表达，炎症，吞噬细胞，NK细胞HumanGenomeOligoMicroarraywasperformed．Thelevelofex

5、pressionofaparticulargeneisdirectlyassociatedwiththeintensityofhybridizationoflabeledmRNA．FluorescenceintensitieswerequantifiedusingtheGeneSpringGXarraytools．Allthedatasareeliminatedthesystematicerrorbetweenchips，operatorsandoperationbyrobustmultichipaverage(RMA)．

6、CalculatearithmeticmeanandT-testofstochasticvolatilitytogetPvalue．ThedifferentialexpressedgenewasdefinedwhenitsPvaluewaslessthan0．05．FourgenesWasrandomlyselectedtobeprovedbyfluorescencequantitativePCR(FQ-PCR)．ThenweselectedthegeneassociatedwithphagocytesandNKcells

7、fromthemicroarray．Results8piecesofmRNAfragmentsassociatedwithphagocyteswerescreenedandallthegeneswereremarkablyupregulatedin盯Egroupcomparedwithcontrolgroup(p<0．05)．18piecesofmRNAfragmentsassociatedwithNKcellswerescreened．Incomparisonwithcontrols，themRNAexpressiono

8、fkillercelllectin—likereceptors(KLR)、killercellimmunoglobulin-likereceptors(KIR)andnaturalⅡABSTRACTcytotoxicityreceptors(NCR)inP1陋groupwerelowerthanthat