《GB4789.15-1994-食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数》.pdf

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1、GB4789.15—1994中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验霉菌和酵母计数MicrobioligicalexaminationoffoodhygieneEnumerationofmoldsandyeastsGB4789.15—19941主题内容与适用范围本标准规定了各类粮食、食品和饮料霉菌和酵母菌计数的检验方法。本标准适用于各类粮食、食品和饮料中霉菌和酵母菌的计数。2引用标准GB4789.28食品卫生微生物学检验染色法、培养基和试剂3设备和材料3．1温箱：25～28℃。3．2振荡器。3．3平天。3．4显微镜。3．5玻塞三角瓶：300mL。3．6试管：15mm×150mm。3．

2、7平皿：直径9cm。3．8吸管：1mL及10mL。3．9酒精灯。3．10载物玻片。3．11盖玻片。3．12广口瓶。3．13牛皮纸袋：121℃灭菌20min。3．14金属勺、刀等。3．15试管架。3．16接种针。3．17橡皮乳头。4培养基和试剂4．1马铃薯-葡萄糖琼脂培养基，附加抗菌素，按GB4789.28中4.79规定。4．2孟加拉红培养基：按GB4789.28中4.81规定。4．3高盐察氏培养基：按GB4789.28中4.78规定。4．4灭菌蒸馏水。4．5乙醇。5检验程序检验程序如下：中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.15—19946操

3、作步骤6．1采样：取样时须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属刀或勺等。在卫生学调查基础上，采取有代表性的样品。样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。粮食（包括粮库贮粮，粮店或家庭小量存粮）样品的采集，可根据粮囤或粮垛的大小和类型，分层定点取样，一般可分三层五点，或分层随机采取不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检。小量存粮可使用金属小勺采取上、中、下各部位的混合样品。海运进口粮的采样：每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛粮超过10000t，则应加采一个样品。必要时采取有

4、疑问的样品送检。谷物加工制品（包括熟饭、糕点、面包等）、发酵食品、乳及乳制品以及其他液体食品，用灭菌工具采集可疑霉变食品250g，装入灭菌容器内送检。6．2以无菌操作称取检样25g（或25mL），放入含有225mL灭菌水的玻塞三角瓶中，振摇30min，即为1：10稀释液。6．3用灭菌吸管吸取1：10稀释液10mL，注入试管中，另用带橡皮乳头的1mL灭菌吸管反复吹吸50次，使霉菌孢子充分散开。6．4取1mL1：10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中，另换一支1mL灭菌吸管吹吸5次，此液为1：100稀释液。6．5按上述操作顺序做10倍递增稀释液，再稀释一次，换用一支1mL灭菌吸管，根据对样

5、品污染情况的估计，选择3个合适的稀释度，分别在做10倍稀释的同时，吸取1mL稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做2个平皿，然后将凉至45℃左右的培养基注入平皿中，待琼脂凝固后，倒置于25～28℃温箱中，3d后开始观察，共培养观察5d。6．6计算方法：通常选择菌落数在10～150之间的平皿进行计数，同稀释度的2个平皿的菌落平均数乘以稀释倍数，即为每克（或毫升）检样中所含霉菌和酵母数。6．7报告：每克（或毫升）食品所含霉菌和酵母数以个/g（个/mL）表示。中华人民共和国卫生部1994—03—18批准1994—09—01实施GB4789.15—1994附录A霉菌直接镜检计数法（补充法）常用的为郝

6、氏霉菌计测法，本方法适用于番匣酱罐头。A1设备和材料A1.1烧杯。A1.2玻璃棒。A1.3折光仪。A1.4显微镜。A1.5郝氏计测玻片：是一特制的、具有标准计测室的玻片。A1.6盖玻片。A1.7测微器：具标准刻度的玻片。A2操作步骤A2.1检样的制备：取定量检样，加蒸馏水稀释至折光指数为1.3447～1.3460（即浓度为7.9%～8.8%），备用。A2.2显微镜标准视野的校正：将显微镜按放大率90～125倍调节标准视野，使其直径为1.382mm。A2.3涂片：洗净郝氏计测玻片，将制好的标准液，用玻璃棒均匀的摊布于计测室，以备观察。A2.4观测：将制好之载玻片放于显微镜标准视野下进行霉

7、菌观测，一般每一检样应观察50个视野，最好同一检样两人进行观察。A2.5结果与计算：在标准视野下，发现有霉菌菌丝其长度超过标准视野（1.382mm）的1/6或三根菌丝总长度超过标准视野的1/6（即测微器的一格）时即为阳性（+），否则为阴性（-），按100个视野计，其中发现有霉菌菌丝体存在的视野数，即为霉菌的视野百分数。附加说明：本标准由卫生部卫生监督司提出。本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。本标准主要起草人罗雪云。本标准由卫生部委托技术