《GBT13093-1991-饲料中细菌总数的测定方法》.pdf

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1、中华人民共和国国家标准f饲料中细菌总数的测定方法GB13093一91Methodfordeterminationofaerobicbacterialcountinfeeds本标准参照采用国际标准ISO4833-1978《食品和动物饲料中微生物学检验方法》。1主肠内容与适用范围本标准规定了饲料中细菌总数的测定方法。本标准适用于饲料中细菌总数的测定。2原理将试样稀释至适当浓度，用特定的培养基，在30士1℃下培养72士3h，计数平板中长出的菌落数，计算每克试样中的细菌数量。3仪器、设备3.1天平:感量为。.1B=3.2振荡器:往复式。3.3干热灭菌箱:50^-200士10C。3.4高压灭

2、菌锅。3.5冰箱:普通冰箱。3.6恒温箱:30士1'C。3.7电炉:可调式。3.8平皿:直径为9cm.3.9吸管:容量为1,10mL,3.10三角烧瓶:容量为250,500mL,3.11玻璃珠。3.12试管:18X180ram.3.13水浴锅:46士1'C。3.14酒精灯。3.15试管架。3.16橡皮乳头。4检验程序细菌总数的检验程序如下国家技术监仔局1991一07一16批准1992一04一01实施GB13093一915操作步骤5.1采样采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。首先准备好灭菌容器和采样工具，如灭菌牛皮纸袋或广口瓶，金属勺和刀，在卫生学调查基础上，采取有代表

3、性的样品，样品采集后应尽快检验，否则应将样品放在低温干燥处。根据饲料仓库、饲料垛的大小和类型，分层定点采样，一般可分三层五点或分层随机采样，不同点的样品，充分混合后，取500g左右送检，小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、中、下各部位的样品混乙、口0海运进口饲料采样:每一船仓采取表层、上层、中层及下层四个样品，每层从五点取样混合，如船仓盛饲料超过10000t，则应加采一个样品。必要时采取有疑问的样品送检。5.2试样稀释及培养5.2.1无菌称取试样10.0g，放人含有90mL稀释液的灭菌三角烧瓶内(瓶内预先加有适当数量的玻璃珠)。经充分振摇，制1:10的均匀稀释液。最好置振荡器中以8

4、000^10000r/min的速度处理2^-3m5.in2.,2用1mL灭菌吸管吸取1:10稀释液1mL,沿管壁慢慢注人含有9mL稀释液的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)，振摇试管，混合均匀，作成1:10'0的稀释液。5.2.3另取一支1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作1。倍递增稀释，如此每递增稀释一次，即更换一支吸管。5.2.4根据饲料卫生标准要求或对试样污染程度的估计，选择2-3个适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。5.2.5稀释液移入平皿后，应及时将凉至46士1℃的平板计数用培养基(可放置4

5、6士1℃水浴锅内保温)注入平皿约15mL，小心转动平皿使试样与培养基充分混匀。从稀释试样到倾注培养基之间，时间不能超过15min,如估计到试样中所含微生物可能在琼脂平板表面生长时，待琼脂完全凝固后，可在培养基表面倾注GB13093一91凉至46土1'C的水琼脂培养基4mLe5.2.6待琼脂凝固后，倒置平皿于30士1℃恒温箱内培养72士3h取出，计数平板内菌落数目，菌落数乘以稀释倍数，即得每克试样所含细菌总数。5.3菌落计数方法作平板菌落计数时，可用肉眼观察，必要时借助于放大镜检查，以防遗漏。在计数出各平板菌落数后，求出同一稀释度两个平板菌落的平均数。菌落计数的报告选取菌落数在30-

6、300之间的平板作为菌落计数标准。每一稀释度采用两个平板菌落的平均数，如两个平板其中一个有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数，如片状菌落不到平板的一半，而另一半菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘2以代表全平板菌落数。6.1稀释度的选择6，.1应选择平均菌落数在30^300之间的稀释度，乘以稀释倍数报告之。6.1.2如有两个稀释度，其生长的菌落数均在30^-300之间，视两者之比如何来决定，如其比值小于2,应报告其平均数;如大于2，则报告其中较小的数字。6.1.3如所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释

7、倍数报告之。6.1.4如所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。6.1.5如所有稀释度均无菌落生长，则以小于(<)1乘以最低稀释倍数报告之。6.1.6如所有稀释度的平均菌落数均不在30-300之间，其中一部分大于300或小于30时，则以最接近30或300的平均菌落数乘以稀释倍数报告之。6.2结果报告菌落在10。以内时，按其实有数报告;大于100时，采用两位有效数字，在两位有效数字后面的数值，以四舍五入方法计算。为了缩短数字后面