分子伴侣协助的基因工程药物重组人干扰素.γ体外重折叠.研究

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1、浙江_人学顿1j学位论文AbstractassistedbyshtGroELl91．345was2．2and3foldsofthatunderspontaneousconditionrespectively．OptimaloperatingparametersinrefoldingofrhIFN-VassistedbyshtGroELl91—345wereasfollows：refoldingtemperature15℃．refoldingtime4h，pH7．7，initialconcentrationofIFN—Y10

2、0—200I_tg／mLandthemolratioofshtGroELl91-345versusIFN—Yhl一2：1．Furthermore，theimmobilizationofslitCn'oELl91-345onNHS—activatedsepharosefastflowmadeitpossibletoberecycled．TheproteinyieldandthespecificactivityofdlIFN—vwgl"e46．29％and9．05x100IU／mgeventheinitialproteinco

3、ncentrationwasupto400pg／mL．Finally,pmliminaryresultswereobtainedintherefoldingofrhlFN-Tassistedbyartificialchaperonesystem(CTABand13-CD)．OptimaloperatingparametersinrefoldingofrhIFN—vassistedbyCTABand13-CDwereasfollows：refoldingtemperature15℃，refoldingtime4h，pH=7．

4、7，ureaconcentration1．5mol／L，CTABconcentration100¨mol／L，thetoolratioof13-CDversusCTAB18：1andthepointofaddingB—CD30minaftertherefoldingprocessbegan．Ⅵ，汕theinitialproteinconcentrationof100pg／mL，theproteinyieldandspecificactivityofrhlFN—TassistedbyCTABandB—CDwas29．76％a

5、nd6．34x100IU／mgcorrespondingly．Keywords：recombinanthumaninterferon-gamma(r血IFN—T)，minichaperoneslatGroEL191—345，refolding浙江人学硕J：学位论文第一章文献综述1．1干扰素概述第一章文献综述1．¨干扰素的发现、命名和分类1957年，Isaacs和Lindemann[1】在研究病毒的干扰现象时，发现将56℃l小时灭活的流感病毒加入火鸡胚绒毛尿囊膜碎片中，经孵育后此膜不但获得了抗流感病毒的能力，而且释放了一类能

6、干扰和抑制病毒复制的因子，即命名为干扰素(interferon，IFN)。1980年，国际IFN命名委员会给IFN下了如下定义：IFN是一类在同种细胞上具有广谱抗病毒活性的蛋白质，其活性的发挥又受到细胞基因组的调节和控制，涉及RNA和蛋白质的合成。表1-1人干扰素(hlFN)的种类和性状Table1-1TypesandpropertiesofhIFNI型Ⅱ型hlFN一ⅡhlFN—PhIFN-T通常类型hlFN-tohIFN—n约20，000(单体)分子量约20，000约40．000(Z聚制t)氨基酸数165～1661721

7、6614623个以上约7个基p：jI数(伪基因4个)(伪基因6个)1Ⅱ型14个以上1内含子003基冈位点Tp21Trl21Tp2112q24．1有无糖链无抗原类型nⅡB主要产生细胞白细胞滋养细胞纤维母细胞Thl

8、据其细胞来源、理化性质和抗原性的差异，分为三大类[2，3】：白细胞产生的晓干扰素(IFN一旺，又称为白细胞型干扰素)及其亚型：成纤维母细胞产生的p干扰素(IFN—p，又称为纤维母细胞型干扰素)及其亚型和淋巴细胞产生的Y干扰素(IFN—Y，又称为淋巴细胞型干扰素)，几乎所有脊椎动物均可产生这三类干扰素。I