实验室培养基制备规范v1

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1、1.目的Objective规范实验室培养基制备、测试、储存和使用，使培养基质量得到控制。2.参考ReferenceSN/T1538.1-2005培养基制备指南第1部分：实验室培养基制备质量保证通则3.范围Scope本程序适用于化验室微生物检测用商品化培养基的制备、测试、储存和使用。4.原理Principle根据每种培养基的不同的特性和使用方法，以及商品培养基标签说明。5.健康与安全HealthandSafety5」有良好的实验室操作规范5.2操作高压灭菌锅时按照实验室设备操作说明书使用(SOP-QA030)6・仪器Laboratoryapparatus6.1电子天平c

2、h0.0lg6.21000mL烧杯6.3量杯6.4培养基瓶6.510mL移液管6.650mL移液管6.7高压灭菌锅HVE-506.8数显pH计精度0.017.试剂Reagent蒸憾水(要求达到实验室二级水标准)8.程序Procedure&1培养基的验收、登记及贮存每批培养基均须在保质期1/3日期内，外观标签完好，包装完好密封。摇动瓶体内容物流动性好，无结块；每批来货须有厂家提供的质控证书。每批来货后登记来货名称、数量、批号和接受H期并更新库存数量。按要求存储每种培养基，常温存储的有：计数琼脂、乳糖胆盐发酵管、孟加拉红琼脂、伊红美兰平板琼脂、结品紫中性红胆盐琼脂、缓冲蛋

3、白陈水等商品化脱水干粉培养基。须4〜8°C冷藏的：卵磷脂干粉。每种培养基在开封后至少在3个月内用完。如未开封参考标签保质期。8.2培养基制备8.2.1首次开封培养基后在培养基瓶口出记录开封FI期。每次使用时观察内容物流动性和均一性，如有受潮结块和不均匀情况应停止使用。8.2.2按标签配制质量/体积计算所需培养基量，例如：计数琼脂称取23.5g于1L蒸憾水中,计算配制400mL琼脂量为23.5X（400/1000）=9.4g,即称取9.4g于400mL水中。如所需培养基为双料则在原用基础上乘2。先加入所需水量，再加入所需培养基量，振摇或用玻璃棒搅拌至培养基充分散开。培养

4、基加入水后如不能充分溶解，应适当加热。8.2.3对于9mL生理盐水稀释剂，应在灭菌后用无菌试管进行分装。乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管等液体培养基应分装后进行灭菌。琼脂类培养基装入蓝盖培养基瓶进行灭菌；生理盐水装入锥形瓶用稀薄纸封口。为防止溢出，液体内容物应不超过容器的3/4o8.2.4按照标签说明进行灭菌。计数琼脂、孟加拉红琼脂、生理盐水稀释剂为121°C15min灭菌；乳糖胆盐发酵管、伊红美兰平板琼脂、乳糖发酵管为115°C15min灭菌。结品紫中性红胆盐琼脂为煮沸（进行煮沸时应佩戴防护眼镜和隔热手套，并时刻注意沸腾，沸腾时应立即转移停止加热）。进行高压灭菌时加贴热敏

5、试纸和放置温度计，以确认灭菌效果。8.2.5灭菌后计数琼脂、结品紫中性红胆盐琼脂放入46±1OC水浴锅中备用，水浴高度必须没过瓶内琼脂高度，水浴后4h内用完。乳糖胆盐发酵管、乳糖发酵管冷至室温后放入4〜8°C冷藏柜冷藏一周内用完。伊红美兰平板琼脂水浴至55°C倾注无菌平板，每皿15〜20mL,待凝固后存储于灭菌密封袋中4〜8°C冷藏备用，一周内用完。用于空气落菌数检测（平板暴露法）的计数琼脂平板和孟加拉红琼脂平板水浴至46°C倾注平板，每皿15^20mL,待凝固后存储于密封的灭菌袋中4~8°C冷藏备用，一周内用完。培养基外袋、试管框或摆放处标识名称和配制H期。8.2.

6、6培养基均须在使用前进行pH值测定。无菌操作取适量培养基凉至室温或恢复至室温,检测前pH计应先预热30min待其稳定后进行校正。如pH值范围不在规定范围内，则停止使用。8.2.7计数琼脂、结品紫中性红胆盐琼脂在水浴至46°C倾注平板，此时应对水浴锅中水银温度计进行读数，温度应在45・5~46・5°C范围内。伊红美兰平板、空气检测用计数琼脂平板和孟加拉红琼脂平板，琼脂表面如有冷凝水，在使用前倒扣于25~50°C烘箱/培养箱中进行干燥。平板培养时每垛不超过6个，平板间留有5cm间隙，以利于空气流通。8.2.8所有培养基废弃前均应进行安全处理，置于灭菌桶内12rC45min

7、灭菌。8.2.9每种培养基的常用配制量配制方法、灭菌方式和pH范围：培养基名称配制方法灭菌方式pH范围计数琼脂称取9.4克计数琼脂于盛有400毫升蒸馆水的蓝盖培养基瓶中。振摇溶解。盖子不可拧紧。121°C;15min7.0±0.2结晶紫中性红胆盐琼脂称取16.64克结品紫中性红胆盐琼脂于盛有400毫升蒸馅水锥形瓶中。振摇溶解。煮沸7.4±0.2乳糖胆盐发酵管（双料）称取70克乳糖胆盐发酵管于盛有1000毫升蒸馆水的烧杯中。玻璃棒搅拌溶解，分装18*180mm试管中，每管10mL,放入小导管，盖好试管盖。115°C；15min7.4±0.2乳糖胆盐发酵