丝素材料组织工程角膜

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1、物理交联再生丝素膜组织工程角膜的生物相容性研究张晓峰刘铁连杨吉成夏蔚钟蕾孙正太王英明夏静【摘要】背景角膜组织工程生物材料在体内应当具备透明性、一定的机械强度、生物相容性和缓慢降解的特点。丝素膜生物材料具备这些特征。目的研究采用物理交联再生丝素膜构建组织工程角膜的可行性。方法用常规培养法培养人角膜上皮细胞（CECs）,将对数生长期的CECs在用家蚕丝制备的物理交联再生丝素膜上进行培养，分别于培养后24、48、72h在倒置显微镜、扫描电子显微镜下观察CECs的生长状态和形态学，并与细胞培养板培养的人CECs形态进行对照。MTT法每H检测和记录再生丝素膜培养后人CECs的增生情况，流式细胞仪检

2、测再生丝素膜培养人CECs的细胞周期和凋亡率。将再生丝素膜4nrnix3nini植入新西兰白兔右眼角膜基质层间，于术后1个月、2个月时裂隙灯下对手术眼眼表进行检查，术后2个月摘除兔眼并制备移植眼角膜组织切片行组织病理学检查，观察再牛丝素膜材料的降解情况及角膜新牛血管（CNV）的生长情况。采用免疫组织化学染色法检测术后1个月、2个月CD34在移植眼角膜组织中的表达，并与正常眼进行对照。结果在24、48、72h3个时间点,倒置显微镜、扫描电子显微镜下见再生丝素膜培养的人CECs与细胞培养板培养法培养的人CECs形态结构无明显差别。再生丝素膜或细胞培养板培养CECs在1、2、3、4、5、6、7

3、d各个时间点心。值相比较差异无统计学意义（*0.641,P>0.05）o再生丝素膜组和细胞培养板培养的CECs凋亡率分别为1.8%、2.0%,细胞G2/G1期分别为1.956、1.945。再生丝素膜角膜植入后2个月时，再生丝素膜为排列整齐的胶原组织替代，角膜内新生血管和炎性细胞均少于移植后1个月。角膜免疫组织化学染色检测显示再生丝素膜槓入角膜后1个月、2个月CD34表达量均明显低于Ad-VEGF165诱导的阳性对照片，而与正常的角膜相比差异无统计学意义（P>0.05）o术后1个月与术后2个月比较，角膜中CD34阳性率的差异无统计学意义（P>0.05）。结论物理交联再生•丝素膜构建组织工程

4、角膜可行，再生丝素膜与角膜组织生物相容性良好，再生丝素膜植入兔角膜基质后无DOI：10.3760/cma.j.issn.2095-0160.2011.09.003基金项H：国家重点基础研究发展计划（973计划）项H（2005CB623900）：苏州大学页学发展基金项目（EE134702）作者单位:215006苏州大学附属第一医院眼科（张晓峰、夏蔚、钟蕾、孙正太、王英明、夏静）；邮编？苏州大学医学部细胞与分子生物学教研室（刘铁连、杨吉成）通信作者:张晓峰,Email：zhanglasik@yahoo.com.cn明显的炎症反应和新生血管。【关键词】丝素膜/物理交联再生；角膜；组织工程；生物

5、相容性；角膜上皮细胞；角膜移植；角膜新生血管中图分类号R772.2Q81Biocompatibilityofphysico-crosslinkedregeneratedsilkfibroinfilmastissueengineeredcorneaZHANGXiao-feng,LIUTie-lian,YANGJi-cheng,XIAWei,ZHONGLei,SUNZheng-tai^WANGYing-ming^XIAJing.DepartmentofOphthalmologyAffiliatedFirstHospitalofSoochowUniversity,Suzhou215006,Ch

6、inaCorrespondingauthor：ZHANGXiao-feng,Email:zhanglasik@yahoo.com.cn[Abstract]BackgroundBiomaterialsforcomealtissueengineeringmustdemonstrateseveralcriticalfeaturesforpotentialutilityinvivo,includingtransparency,mechanicalintegrity,biocompatibilityandslowbiodegradation.Silkfilmbiomaterialhadbeench

7、aracterizedtomeetthesefunctionalrequirements.ObjectiveThisstudywastoinvestigatethefeasibilityofphysico-crosslinkregeneratedsilkfibroinfilmastissueengineeredcornealscaffold.MethodsHumancornealepithelialcells(CECs)linksw