一个猪场高致病性prrsv的分离鉴定

《一个猪场高致病性prrsv的分离鉴定》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、一个猪场高致病性PRRSV的分离鉴定　　摘要：本研究对一个猪场高致病性PRRSV疑似病例进行了病理剖检、PRRSVN蛋白基因RT-PCR扩增以及序列测定和分析。结果表明，N2号分离株N蛋白核苷酸序列与高致病性毒株（JXA1株、HuN4株、SX-1株、TJM株）的一致性均为99.1%，N3/N4号与高致病性毒株的一致性均为98.9%，由此判定该猪场病猪感染毒株为高致病性PRRSV。该研究结果可为养猪生产中高致病性PRRSV感染的判断提供借鉴。　　关键词：病理解剖；PRRS；高致病性PRRSV；RT-PCR；序列测定　　中图分类号：S858.285.3文献标识号：A文章编号：1

2、001-4942（2016）12-0129-04　　AbstractThesuspectedcasesofhighlypathogenicPRRSVfromapigfarmwereconductedautopsy，thegenesequenceofN-proteinofPRRSVwasamplifiedbyRT-PCR，andthenitssequencewasdeterminedandanalyzed.TheidentityofthenucleotidesequenceofN-proteinwas99.1%betweentheisolateN2andthehighlypa

3、thogenicstrains（JXA1，HuN4，SX-1andTJM），andthatofisolateN3/N4was98.9%withthehighlypathogenicstrains.TheresultsshowedthattheinfectedviruswashighlypathogenicPRRSVinthepigfarm.ThisresearchprovidedareferenceforthediagnosisofhighlypathogenicPRRSVinfectioninswineproduction.4　　KeywordsPathologicala

4、natomy；PRRS；HighlypathogenicPRRSV；RT-PCR；Sequencing　　猪繁殖与呼吸障碍综合征（PRRS）俗称猪蓝耳病，由动脉炎病毒科猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（PRRSV）引起，是一种急性病毒性传染病[1，2]。高致病性PRRSV是我国现阶段猪蓝耳病流行的主导毒株，对猪呼吸系统、繁殖系统、神经系统、免疫系统、消化系统均有强的致病力，有很多猪场因为感染该病遭到毁灭性打击[3-8]。2016年6月份，某自繁自养的猪场发生疫情，该猪场的哺乳仔猪陆续发病，出现眼睑水肿、发热、食欲减退、皮肤发红、呼吸急促等现象，有的可见咳嗽、腹泻、震颤等症状，发病

5、率达到80%，死亡率达到50%以上，使用黄芪多糖、抗生素等治疗效果均不明显。　　为了对该猪场病情进行确诊，以便对症治疗，本研究对疑似病例进行病理解剖、RT-PCR扩增及序列测定和分析，以期对PRRSV毒株做出准确判断，为及时采取有效的控制措施、提高猪的成活率提供依据。　　1材料与方法　　1.1样品采集　　对4例病死猪进行解剖，观察病理变化。分别采集各病猪的肾、脾、肺、淋巴结组织各少许，-20℃低温保存备用。　　1.2材料和试剂　　PRRSV阳性对照由本实验室保存；RT-PCR一步法试剂盒、DL2000DNAMarker、凝胶回收试剂盒等购自大连宝生物工程有限公司；PTC-2

6、000型PCR仪购自美国MJResearch公司。4　　1.3引物设计与合成　　根据PRRSVN蛋白基因序列设计引物，由上海生工生物工程技术服务有限公司合成。引物序列为正向引物F：5′-ATGCCAAATAACAACGG-3′；反向引物R：5′-TGCTGAGGGTGATGCTGT-3′。引物的扩增片段大小为369bp。　　1.4样品处理与RNA提取　　样品RNA的提取参照文献[9]，试验操作均在冰盒上完成，所用枪头、离心管均为RNase-free。取约2g病料加入适量灭菌的PBS溶液（0.01mol/L，pH7.4）进行研磨，研磨后反复冻融3次，4℃、5000r/min离

7、心2min；取250μL上清加入750μLTrizol和200μL氯仿，振荡混匀，-20℃静置5min，4℃、12000r/min离心15min；取500μL上清加入等量的异丙醇，颠倒数次，-20℃静置20min，4℃、12000r/min离心15min收集沉淀；75%酒精洗涤沉淀后，20μL灭菌水溶解沉淀即为样品RNA，-80℃保存备用。　　1.5RT-PCR扩增　　RT-PCR扩增采用一步法。反应体系为25μL，其中：2×1StepBuffer12.5μL，PrimeScript1StepEnzymeMix1μ