津血源增加口干症模型鼠唾液分泌机制实验探究

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1、津血源增加口干症模型鼠唾液分泌机制实验探究［摘要］为分析津血源的具体作用机制，该实验对津血源增加口干症模型SD大鼠唾液分泌与激动受体之间的关系进行了研究。研究通过使用M受体阻滞剂4-二苯乙酰氧基-N-甲基-哌喘(4-DAMP)和阿托品，或肾上腺受体阻滞剂酚妥拉明，制作3组口干症模型大鼠；造模成功后，予中药津血源灌胃，根据临床常用剂量及SD大鼠体表面积换算，阿托品组将实验动物分为津血源低、中、高剂量组，4-DAMP及酚妥拉明组灌胃中剂量津血源。所有动物给药后，连续测定150min的唾液分泌量，观察津血源增加唾液分泌的作用特点及与受体之间的关系；并分离大鼠的颌下腺

2、组织，通过Westernblot分析津血源对颌下腺细胞水分子通道蛋白5(AQP5)表达的影响。结果发现，比较各组唾液分泌量，与生理盐水组、酚妥拉明组、4-DAMP组及阿托品组相比，津血源组的唾液分泌明显增加，并存在明显差异，P2.2WesternBlot检测AQP5毛果芸香碱(1mg•kg-1)尾静脉给药，作为AQP5水平表达的阳性对照组。津血源灌胃30min后，脱颈处死大鼠，切开双侧颈部，取双侧下颌下腺腺体组织。样品通过RIPA裂解获得上清，每个样品分别上样80ugo上样完毕后，聚丙烯酰胺凝胶先90V跑完积层胶，再将电压升至200V直到电泳结束。电泳结束后，

3、取下凝胶进行转膜，恒压100V转膜，约为1.5ho电转结束后，取下膜后先用PBS洗涤4次，每次5mino然后置于5%脱脂奶粉封闭液中封闭37°C1ho用封闭液稀释一抗，膜在一抗稀释液中37工反应1ho洗膜4次，每次5min；用含5%牛奶的封闭液稀释二抗。膜在二抗中37°C反应1ho最后，洗膜ECL显影。2.3统计方法结果用±s来表达。采用GraphPadsoftware软件，进行统计数据及检验。统计方法用单因素方差分析或者非参秩和检验，P阿托品与4-DAMP均是M3受体抑制剂，能完全阻断M3受体的结合与激活，从而抑制唾液的分泌。其中，4-DAMP是选择性毒蕈碱

4、M3受体阻滞剂,抑制腺体分泌力量较强；阿托品是非选择性毒蕈碱M受体阻滞剂，能竞争性阻断各种M胆碱受体亚型，对唾液腺与汗腺的作用最敏感。在本实验中，当4-DAMP和阿托品尾静脉以1mg•kg-1给药后，大鼠唾液的分泌均受到抑制。而津血源均能缓解两者介导的唾液分泌抑制，增加大鼠唾液分泌，尤其是阿托品组表现明显，这些结果提示，津血源的增加唾液分泌作用可能通过毒蕈碱M3受体介导的途径有关。酚妥拉明是一种短效类的非选择性a受体阻滞剂，与受体结合力弱，容易解离，在体内作用维持时间短暂，又称竞争性a受体阻滞剂。在本实验中，给药酚妥拉明（1mg-kg-1)后，唾液分泌受到轻度

5、的抑制，而津血源可解除由酚妥拉明介导的唾液分泌抑制作用，并增加唾液分泌，提示津血源可恢复由肾上腺受体阻滞剂介导的唾液分泌抑制。这些结果表明津血源对增加唾液分泌的作用，有一部分与兴奋肾上腺素受体相关。在实验中，根据津血源临床常用剂量，通过SD大鼠体表面积换算，分别予0.22,0.5,1.1mL3个剂量组，但是津血源1.1mL灌胃后，大鼠均出现死亡，考虑津血源灌胃剂量过大，易误入气管，且大鼠在麻醉状态下，消化系统的吸收能力较正常低，无法接受大剂量的中药灌胃，因此，实验中只取了2个剂量的数据。AQPs具有在细胞的血管面和腔面之间转运水分的功能，占唾液中水分总量的很大

6、一部分。它们表达广泛，迄今为止,在哺乳动物已发现13个成员(AQP0-12),在鼠和人的唾液腺细胞上发现了AQP3,AQP5和AQP8[13]O其中，AQP5是一种已知的可调节颌下腺体唾液分泌的蛋白，与SS患者的唾液分泌密切相关。前期动物实验[13]发现，津血源可明显增强SS模型鼠唾液腺中AQP5的表达。在本实验中，对照组下颌下腺中有AQP5的表达，毛果芸香碱可诱导及增加AQP5的表达，而各阻断剂组的颌下腺细胞AQP5的表达均较正常组下降。而给药津血源后，AQP5的表达量均得到增加，以阿托品组明显，提示津血源可以缓解各阻断剂抑制大鼠唾液腺细胞AQP5蛋白的表达

7、，增加AQP5蛋白量的表达。这些结果说明，解除毒蕈碱M3受体及肾上腺素受体引起的颌下腺AQP5蛋白量表达的抑制作用，增加AQP5蛋白的表达，是津血源介导的唾液分泌功能增强的部分机制。通过本次研究发现，津血源增加唾液分泌可能是通过毒蕈碱M(尤其是M3受体)，肾上腺素受体介导的作用途径,增加唾液腺细胞膜AQP5的表达，促进唾液分泌。但津血源中具体何种有效成分与这些受体相关仍不明确，有待进一步研究。［参考文献］［1］钱先，马永祯，张梅涧，等•津血源治疗干燥综合征的临床研究［J］.中华实用中西医杂志，2003,16(7)：975.［2］钱先，马永祯，张梅涧，等.中药津

8、血源治疗干燥综合征的临床观察［J］・中