子痫前期患者胎盘组织中tnf-α-caspase-3表达的研究

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1、子痫前期患者胎盘组织中TNF-aCaspase-3表达的研究【摘要】目的探讨TNF-a、Caspase-3在子痫前期患者胎「组织中的表达及意义。方法子痫前期患者60例(包括子痫前期轻度、子痫前期重度各30例)为实验组，正常妊娠妇女30例为对照组,利用免疫组织化学SP法检测两组胎盘组织中TNF-a、Caspase-3的表达。结果实验组TNF-a的表达均较对照组明显升高(P0.05)o1.2诊断标准子痫前期轻度，子痫前期重度的诊断标准参照谢幸、苟文丽第8版妇产科学[3]o1.3主要试剂兔抗人TNF-a多克隆抗体购自北京博奥森物技术有限公司。鼠抗人Caspase-3多克隆抗体、SP免

2、疫组化系列工作液试剂盒、DAB显色液均购自北京中衫金桥生物技术有限公司。具体操作参照试剂盒说明书。1.4实验方法三组孕妇均于胎盘娩出后20min内采集标本，从胎盘母体面中央切取胎盘组织约1.0cmXl.0cmX1.0cm,注意避开梗死及钙化区。用生理盐水反复冲洗,用10%中性福尔马林溶液固定24h以上，常规制成石蜡组织块。采用免疫组化SP法测定胎盘组织中TNF-Q、Caspase-3的表达。试验设PBS代替一抗作为空白对照。1.5结果判定将根据细胞内染色强度和阳性细胞数分级。根据染色强度分级：无染色或染色不清计为0分；淡黄色计为1分；少量深棕色颗粒计为2分；大量深棕色或褐色颗粒计

3、为3分。估算阳性细胞数：无阳性细胞计0分；50%计3分。取以上两项积分之和：积分0〜1分为（-）；2〜3分为（+）;4〜5分为（+）；>5分为（+++）o1.6统计学方法所有数据均采用SPSS13.0进行统计学处理，计量资料采用单因素方差分析；计数资料采用x2检验和秩和检验；变量间的相关分析采用Spearman等级相关分析。以P<0.05表示差异具有统计学意义。2结果2.1TNF-a、Caspase-3两者在对照组及子痫前期轻度、子痫前期重度中的表达。1.1.1TNF-a的表达胎盘合体滋养细胞内可见TNF-a棕黄色阳性颗粒，其主要表达于胞浆和胞膜。对照组胎盘组织中未见或仅见少量弱

4、阳性细胞。而子痫前期轻度及重度组中TNF-a的表达量明显增加。TNF-ct在对照组的表达阳性率53.34%,在子痫前期轻度组胎盘中表达的阳性率为83.33%,在子痫前期重度组胎盘中表达的阳性率约为96.67%OTNF-a在对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组三组间均有不同程度的表达，差异具有统计学意义（P<0.05）,且随着子痫前期的病情加重，TNF-a的表达逐渐增加。见表lo2.1.2Caspase-3的表达胎盘绒毛小叶的合体滋养细胞内可见Caspase-3棕黄色阳性颗粒，主要表达于细胞浆，部分于细胞核阳性表达。对照组胎盘组织中未见或仅见少量弱阳性细胞，而子痫前期轻度及重度组

5、中Caspase-3的表达量明显增加。Caspase-3在对照组的中胎盘表达的阳性率为46.66%,在子痫前期轻度组胎盘中表达的阳性率为80.00%,在子痫前期重度组胎盘中表达的阳性率约为93.33%OCaspase-3在对照组、子痫前期轻度组及子痫前期重度组三组间均有不同程度的表达，差异具有统计学意义(P<0.05),且随着子痫前期的病情加重Caspase-3的表达逐渐增加。见表2。2.2Caspase-3和TNF-a的相关性分析子痫前期组：子痫前期轻度组两者呈正相关，相关系数r=0.67&P=0.008<0.05；子痫前期重度组两者呈正相关，相关系数r=0.820,P=0.0

6、21<0.05o对照组：两者呈正相关，相关系数r二0.542,P二0・000〈0・05。3讨论子痫前期是妊娠期特有的疾病，是妊娠期髙血压疾病的严重类型，其发病原因尚未完全阐明［4］。目前研究认为,血管内皮细胞损伤释放血管活性物质，是导致高血压病的先兆［5］,也是子痫前期病理变化的中心环节［6］。由于终止妊娠后多数患者的病理变化可以逆转，这说明胎盘在子痫前期的发病中起着重要的作用［7］。妊娠期母体会出现一系列血管炎性反应的适应性变化，而子痫前期则使这种适应性变化发生紊乱。蜕膜中的细胞数量大大增加，其激活时释放的有害物质造成内皮损伤。TNF-a、IL-6和IL-8等细胞因子被命名为促

7、炎性细胞因子，这些细胞因子在细胞信号转导系统中起重要作用，调解着机体的生理功能，而这些细胞因子又可以导致血管内皮细胞形态与功能的改变。有研究表明，TNF-a对血管内皮有直接的损伤作用，并且妊娠高血压病患者血中TNF-a含量的增高与血管内皮细胞损伤呈正相关［8］。而TNF-a在子痫前期的氧化应激中产生了重要作用，造成产生吞噬脂质的巨噬细胞、血小板减少，微血管凝血，毛细血管通透性增加,致使脂质过氧化物产生增多，从而损伤内皮。本实验利用免疫组化法检测了正常孕妇、子痫前期轻度与重度患者胎