概述标记免疫分析检测肿瘤标志物的方法

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1、概述标记免疫分析检测肿瘤标志物的方法李可迪,2014222791【摘要】肿瘤标志物是肿瘤组织和细胞产生的与肿瘤形成、发生相关的物质,种类繁多。检测肿瘤标志物对肿瘤的早期发现、判断疗效及预后等方而均有重要意义，能够用免疫学、生物学及化学的方法检测到。其屮标记免疫分析因具有超灵敏度、高特异性而成为检测肿瘤标志物的常用检测方法。【关键词】标记免疫分析；肿瘤标志物；检测方法；综述肿瘤标志物是指恶性肿瘤的发生和增值过程中，因肿瘤细胞的相关基因表达或机体对肿瘤产生反应而异常变化的一类物质。肿瘤标志物自发现至今已有100多年历史，从20世纪60年代开始，其在临床上开始被广泛

2、应用，在肿瘤的发现和医疗中发挥了重要作用。其主要用于原发肿瘤的发现，肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤类别和发展程度的判断、肿瘤治疗效果的观察和评价以及肿瘤复发和预后的预测等。目前检测肿瘤标志物的常用方法有三大类：生物化学方法、免疫学方法及分子生物学方法。其中免疫学方法在临床上最常用。常见的标记免疫分析主要包括酶联免疫分析、荧光免疫分析、化学发光免疫分析和放射免疫分析。木文对上述常见的肿瘤标志物检测方法进行综述。1放射免疫分析(RIA)放射免疫分析自20世纪60年代问世以来，在生物医学各个领域得到了广泛的应用。放射分析法是利用特异性抗体与标记抗

3、原的竞争结合反应，通过测定放射性复合物来计算出非标记抗原量的一种超微量分析技术。放射免疫分析的原理是一定量的特界抗体(Ab)与一定量的特界性标记抗原(*Ag),在一定条件下结合，形成一定量的标记抗原抗体复合物(*AgAb)。这种复合物的结合服从可逆反应的质量作用定律。如果在系统屮加入非标记特异性抗原(Ag)也能和抗体结合，与*血竞争结合Ab。理论和实践证明，反应平衡后,Ag>AgAb或*人就1)与*人&的比值和Ag的量呈函数关系，可以计算出AG的量。基本过程包括加样、孵育、分离结合和游离部分、测放射性、数据处理。放射免疫分析技术是一种超微量分析技术，具有很高的

4、精密度、灵敏度和准确度，标记物是抗原。反应条件要求一般，但该技术所用试剂具有放射性，对人体有一定的危害，实验人员应加强防护。同时试剂存在半衰期，试剂必须在半衰期内用完，否则试剂会作废，这需要科学地做好试剂计划。另外反应过程中抗原的含量低到一定程度时会出现不确定因素，使灵敏度受到限制匚免疫分析(EIA)由于放射免疫分析有着自身固有的，难以克服的缺陷,Engvall和Vanwccmcn各自领导的研究小组分别以酶代替同位素，与1971年创立了酶分析技术，并得到了迅速的普及和发展。酶标记免疫分析技术是用酶分子代替放射性核素标记抗原或抗体分子，进行竞争性或非竞争性免疫分

5、析的技术，酶联免疫吸附分析法(EL1SA)现在被广泛应用于实验诊断中。其在抗体分子上连接酶分子，进行夹心法免疫反应，反应结束后，将结合的复合物和游离抗体分开，取结合部分，利用酶的催化活性，由结合部分上的酶将特定的底物转化为特定的颜色，颜色的深浅与酶的量呈正比，而酶的量乂和复合物的量呈正比，由此给出复合物的量。常用的酶是辣根过氧化物酶，常用的底物是四甲基联苯胺。ELISA的优点是普通的分光光度计就可以工作，仪器的灵敏度较放免仪有所降低，但酶分子可形成大量有色产物，会对灵敏度有所补偿。因此ELISA法也具有很高的灵敏度。同吋本方法没有应用放射线，避免了放射线对人员

6、的危害。ELISA的不足之处是可能会出现“倒钩”现象，使实验出现假阴性或抗原、抗体的实际含量减低。另外，EL1SA法实验是一次性的，显色反应往往需要在一定时间内读数，无法重复测量3荧光免疫分析(FIA)时间分辨荧光免疫分析技术(TrFLA)的标记物由澜系元素通过一定的连接剂与抗体蛋白相连而组成。原理为待测物通过免疫反应形成的复合物上带有锢系元素(常用術元素)。镐元素经紫外线激发后会发出长波荧光。在免疫反应结束后需向反应体系中加入一个〃荧光增强剂〃，提高荧光强度。上述激发可以反复激发，这就大大增强信号强度。反应过程直到荧光衰减到很低水平，停止记录。荧光强度与待测

7、物的浓度相关，通过计算机数据处理系统可以给出待测物的浓度TrFLA具有信号强，缩短测量时间并提高灵敏度等优点。存在的缺点是标记物和荧光增强剂制备难度大，且荧光增强剂含一定有毒物质，废物应该严格处理。4化学发光免疫分析(CLIA)1981年，Pannagli将化学发光原理和免疫反应结合起来，建立了化学发光免疫分析法。免疫化学发光分析是将标记物改为能产生化学发光的化合物，代替放射性标记物，最终根据发光信号的强弱来反映复合物的量。发光化合物在碱性条件下遇到过氧化物便发生单光子发射，光子的数量和发光化合物的量呈正比，而发光化合物的量是结合在抗原抗体复合物上的，由此反映

8、复合物的量。免疫化学发光分析的优点是有