hcv核心蛋白对hepg2细胞增殖的影响

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1、HCV核心蛋白对HepG2细胞增殖的影响及初步分子机制探讨谢艳，黄世峰，曹炬，张莉萍（400016重庆，重庆医科大学附属第一医院检验科）[摘要]目的利用腺病毒表达系统，研究丙型肝炎病毒（HCV）核心蛋白对HepG2细胞增殖、Wnt1以及microRNA152表达水平的影响。方法通过HEK293细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HCVcore，分别感染HepG2细胞后，通过RT-PCR和Westernblot证实HCV核心蛋白在HepG2细胞中高效表达。MTT法、细胞周期测定和克隆形成实验检测HCV核心蛋白对H

2、epG2细胞增殖的影响。SYBR探针荧光定量PCR和Westernblot检测的HepG2-HCVcore细胞中Wnt1和miR-152表达的变化。用miR-152inhibitor转染HepG2细胞后，SYBR探针荧光定量PCR、Westernblot检测HepG2细胞中Wnt1mRNA和蛋白表达水平变化。结果Ad-GFP和Ad-HCVcore腺病毒经HEK293扩增后滴度分别为1.5×109pfu/ml和1.6×1010pfu/ml。Ad-HCVcore腺病毒感染HepG2细胞后，HCV核心蛋白高效表达。感染48h后，

3、与HepG2-Mock细胞相比，Ad-HCVcore可显著促进HepG2细胞增殖（P<0.05），加快G1/S细胞周期进展（P<0.05），并促进细胞克隆形成（P<0.05）。Ad-HCVcore腺病毒感染可在显著上调HepG2细胞中Wnt1mRNA和蛋白的表达量（P<0.05）的同时下调miR-152（miR-152）表达水平。同时，miR-152inhibitor可显著上调Wnt1mRNA和蛋白水平。进一步生物信息学分析显示，Wnt1基因mRNA3'-UTR含有miR-152结合位点。结论HCV核心蛋白可能通过抑制mi

4、RNA-152而减弱其对Wnt1mRNA的降解及翻译阻碍作用，进而达到上调Wnt1致Wnt信号通路激活，促进肝癌细胞增殖的效应。[关键词]HCV核心蛋白；Wnt1；miR-152；HepG2细胞系[中图法分类号][文献标志码]ATheeffectofHCVcoreproteinoncellproliferationofHepG2cellsandtheinitialexplorationofthemolecularmechanisms[Abstract]ObjectiveToconstructtheretroviralvec

5、torcontainingHCVcoreproteintostudytheproliferationeffectofHCVcoreprotein,detectedtheexpressionofWNT1andmicroRNA152intheHepG2cellline.MethodsArecombinantadenovirusexpressingtheHCVcoreproteinalongwithEGFPwasusedtotransfecttheHepG2cellline.TheexpressionofHCVcoreprote

6、ininHepG2cellswasevaluatedbyRT-PCRandWesternblot.Advirus-HCVwastransfectedintoHepG2cellsdetectedbyMTTassay,FlowCytometryandColonyFormationAssaytoverifiedtheproliferationeffectsofHCVcoreproteininHepG2cells.RT-PCRandWesternbolttodetecttheexpressionofWNT1andmiR-152in

7、HepG2cellstransfectedwithHCVcoreproteinandmiR-152inhibitor.Results补充P值AhightiteroftherecombinantadenovirusexpressingHCVwasobtained,andtheviruswaseffectivelytransfectedintoHepG2cells.HCVcoreproteinwasacceleratingcellproliferationandpromotingG1/Scellcycleprogression

8、aftertransfectedwithAd-HCV48hours.WefoundthatAd-HCVcoreinfectedcellshadmoreandbiggercoloniesthanAd-EGFPinfectedcells.Ontheotherhand,HCVcoreproteincaused