nuak1—nfkb通路新转录调控或共调控因子

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1、NUAK1—NFkB通路新转录调控或共调控因子？杨兰兰，刘先俊*（重庆医科大学：分子医学与肿瘤研究中心，重庆400016）摘要：目的确定蛋白激酶NUAK1的定位，检测其是否参与NFkB信号通路。方法构建质粒NUAK1-pEGFP顺转于293细胞，然后用DAPY染核，荧光显微镜下观察NUAK1的定位。构建质粒NUAK1-pcDNA3.1和NUAK1(D178N)-pcDNA3.1，以空载pcDNA3.1做对照，分别过表达于带稳转有NFkB荧光酶素报告基因质粒的293细胞株中，检测在有或没有TNFα刺激下的NFkB荧光酶素报告基因的活性，为进一步确认，对NUAK1-pcDNA3.1设

2、了个浓度梯度进行检测。结果NUAK1定位于细胞核中，在293细胞中NUAK1能够抑制NFkB的活性，且和其表达量成正相关。结论NUAK1有可能是NFkB的转录调控或共调控因子。关键词：NUAK1；NFKB；239细胞；核定位；转录调控NUAK1---anewtranscriptionalregulatedorco-regulatedfactorofNFkBpathway?YANGLanlan，LIUXianjun(MolecularMedicineandCancerResearchCenter,ChongqingMedicalUniversity,Chongqing400016)

3、Abstract:ObjectiveTomakesurethesubcellularlocationofNUAK1andthatwhetherNUAK1isinvolvedinNFkBpathwayMethodsFirstpreparedplasmidsNUAK1-pEGFP,NUAK1-pcDNA3.1andNUAK1(D178N)-pcDNA3.1.ThenafterNUAK1-pEGFPwastransientlyexpressedintransfected293cells,nuclearDNAwascounterstainedwithDAPYandthecellswere

4、observedunderfluorescencemicroscopesystem.TotesttheNFkBluciferaseactivationnoorunderthestimulationofTNFα,withthecontrolofpcDNA3.1,NUAK1-pcDNA3.1andNUAK1(D178N)-pcDNA3.1wereoverexpressedina293celllinewhichwasstablyexpressingNFkBluciferasepromoterreporter,andaplasmiddoseresponseexperimentwasper

5、formedforfurtherstudy.ResultsNUAK1wasconstitutivelydistributedinthenucleus.In293cells,NUAK1inhibitedtheNFkBluciferaseactivationandhadasignificantlypositivecorrelationwiththeexpressionofNUAK1.ConclusionNUAK1mightbeoneregulatedorco-regulatedtranscriptionalfactoroftheNFkBpathway.Keywords:NUAK1;N

6、FkB;293cell;NucleusLocation;TranscriptionalRegulationAMP-激活蛋白激酶（AMPK）是真核生物能量代谢信号转导中一个高保守的关键因子，有着能量传感器之称，它不仅调控了细胞的能量代谢，更控制着整个生命个体的能量平衡。目前它定位于日益增长的代谢紊乱病中肥胖症和Ⅱ型糖尿病的可能药物治疗靶点（1，2）。它是一个异源三聚体，包括一个催化亚基（α1、α2）和两个调节亚基（β1、β2和γ1、γ2、γ3），不同物种的这些亚基的亚型和定位存在区别（3-5），其中催化亚基都含有一个激酶区（KD）和紧跟其后的一个自抑制区（与UBA（ubiquiti

7、n-associateddomain）具有低同源性）。而AMPK的激活就是主要通过其上游激酶（如：LKB1和CaMKK）磷酸化其KD区活化环中的第172位的苏氨酸（6-8）。根据目前的研究，也存在一些与AMPK相关的激酶，比如：*通讯作者：刘先俊023-68485991lxj6422@yahoo.com.cnNUAK1(ARK5)、NUAK2(SNARK)、BRSK1、BRSK2、MARK1、MRAK2、MARK3、MARK4、SIK1、SIK2、SIK3和MELK等，由KD区的