微生物采油菌种室内筛选与评价技术研究

《微生物采油菌种室内筛选与评价技术研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。

1、微生物采油菌种室内筛选与评价技术研究摘要：针对中原油出油藏的三高特点（高温、高压、高盐），应用微生物室内富集培养与分离纯化技术，筛选出具有应用潜力的四株微生物采油菌种。室内评价表明，四种微生物可耐受90°C高温、15MPa压力、10X104mg/L矿化度，在液体培养过程屮均能产生表面活性剂和有机酸，C11以下低碳烷怪不能被细菌利用。对高粘度原油降粘率高达68%,低粘度原油作用不人，最高降粘率16.1%,具有矿藏应用价值。关键词：微生物采油；中原油出；菌种筛选；性能评价引言：微生物釆油技术目前在世界各国得到普遍研究与应用山現其主要机理是降解原油，

2、并代谢产生有利于提高采收率的表面活性剂、有机酸、气体等。现在市场上一般采汕用微生物的适用油藏温度在40〜60°C、矿化度小于5X104mg/L,不适合中原油出油藏的三高特点（地层温度75-140°C＞油藏饱和压力10~25MPa、矿化度7〜32X104mg/L）o为此中原油田与山东大学微生物技术国家重点实验室合作开展了适应于中原油出地质特点的采油用微生物菌种筛选与评价工作，并获得四株具有应用价值的微生物釆油菌种。1微生物室内筛选与鉴定1.1菌种来源样品为73个屮原油出污水、炼油厂废水样和28个含油污泥样。1.2培养基组成与配制121分离降解石汕

3、微生物的无机盐溶液NaC10.5%,（NH4）SO4O.I%,MgSO4.7H200.025%,NaNO30.2%,KH2PO40.5%,K2HPO4.3H2O1.0%1.2.2以原油为碳源的液休培养基在50ml厌氧培养瓶中加入原油0.2g,按厌氧液体培养基制备方法［刑分装无机盐溶液10ml,120°C蒸汽灭菌20min,然后用无菌注射器注入2mlATS溶液和0.2mll.0%Na2S和NaHCO3溶液。1.2.3以原油为碳源的固体培养基无机盐溶液添加酵母膏0.1%,原油4.0%,琼脂2.0%,调pH值为7.0-7.2,0.1MPa灭菌20mi

4、no1.2.4以葡萄糖为碳源的固体培养基无机盐溶液添加酵母膏0.1%,葡萄糖2.0%,琼月旨2.0%,调pH值为7.0-7.2,0.7-0.8MPa灭菌20mino1.2.5以葡萄糖为碳源的液休培养基无机盐溶液添加酵母膏0.2%,葡萄糖2.0%,调pH值为7.0-7.2,0.6-0.7MPa灭菌20mino1.3厌氧菌种的富集配养与分离纯化1.3.1将适量的污水或土样及原油0.2g放入厌氧培养瓶中（每个样品做0%和10%两个矿化度），按严格厌氧操作取适量无机盐溶液，40°C或60°C（下同），200〜250卬m摇床培养7天。1.3.20.5ml

5、±述培养液注入以原油为碳源的厌氧液体培养基，相同条件培养7天。1.3.3对132进行NO畀离了检验⑷，若有红色反应，则取其培养液0.5n）l稀释到一定程度,在葡萄糖培养基上涂布，放入真空干燥器内，真空脂密封抽真空30min,然后充入高纯氮气,再抽真空lOmin,重复四次，使干燥器保^-0.02MPa的真空度，相同温度恒温培养3天，134取不同形态的菌落在葡萄糖固体培养基上划线，反复抽真空充氮气，厌氧条件恒温培养。如此反复儿次，直到菌落形态一致。1.3.5将划出的不同菌落在原油为碳源的同休培养基上划线，抽真空充氮气，厌氧培养7天，所得菌落既为纯化

6、菌种。1.3.6挑取纯化的菌落分别接种在好氧、厌氧两种条件的原汕液体培养基中，200〜250「pm摇床培养，观察其原油降解的情况，将能降解原油的菌种保存在葡萄糖斜面上。通过以上方法获得四株可降解原油的兼性厌氧菌种，分别是SDB-KSDB・2、SDB-3.SDB-4o1.4菌种扩大培养小试研究1.4.1摇瓶实验⑴培养基配方的确定：采用正交实验法确定碳源、氮源、磷源的种类及浓度。⑵摇瓶工艺参数的确定：固定摇瓶及装量，变换不同接种量、摇瓶转速及培养时间，进行生长曲线的测定，进而确定摇瓶最适工艺参数。1.4.210L及50L发酵罐工艺参数的确定采用德国

7、B.Braun公司生产Biostat系列微机控制自动发酵罐。10L发酵罐工艺参数参考摇瓶工艺参数，通过分批发酵实验定时取样，测定菌数及活性，确定接种量、通气量、搅拌转速、消沫剂浓度、培养时间等参数。50L发酵罐工艺是在10L发酵罐工艺参数的基础上进一步实验获得的，表1是50L发酵罐工艺参数。表150L发酵罐工艺参数菌号接种量通气最(v/vmin)搅拌时间（rpm）消沫剂时间(hr)SDB-15%1:0.51600.3%。20SDB-25%1:0.51600.3%。20SDB-35%1:0.31000.3%。20SDB-48%1:0.618()0

8、.3%。201.5菌液活性保存研究微生物菌液要保持其活性需作到两点，一是目的菌处于休眠状态，代谢速度缓慢；二是不能污染杂菌或即使污染杂菌也不能繁殖牛长