清远市产学研结合科技创新平台建设可行性报告(参考提纲)

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1、黑山羊水疱性疫病防控技术研究与推广可行性报告—、立项依据(—)目的意义黑山羊作为优质肉羊品种正在受到人们的重视。清远黑山羊是我市重点打造的清远农产品“四张名片”之一，而且建立完善的黑山羊疫病防控技术是推动广东草地畜牧业产业发展的基础。目前广东省牛羊养殖产业发展处于起步和快速发阶段，但特点是主要以农村小规模养殖为主，养殖水平低，牛羊疫病频发，严重制约了产业的发展。在羊病防控方面，水疱性疫病传染性强、死亡率高、危害大的重大疫病,主要常见的有口蹄疫、小反刍兽疫、羊痘、传染性脓疱、蓝舌病等。还有其它如：恶性卡他热、水疱性口炎等传染病少见或被消灭或国内尚未发生。本项目主

2、要针对困挠本地区山羊养殖业所面临的主要疫病问题开快速检测鉴别检测技术研究，主要以危害大、临床易混淆、引起牛羊出现水疱性特征的传染病为研究对象，开展快速鉴别诊断为研究，病原包括口蹄疫、小反刍兽疫、羊痘、传染性脓疱、蓝舌病，建立快速鉴别方法，并在实验室和临床开展应用和防控示范。项目对于黑山羊疫病的及时发现、诊断和采取相应防控措施具有重要意义。通过建立鉴别诊断技术、临床综合防控、防控示范点建设、防疫人员培训等，为我省牛羊养殖的健康发展提供障。（二）国内外现状和发展趋势口蹄疫是由小核酸病毒科的口蹄疫病毒引起的偶蹄动物的急性、热性传染病，特征是口腔粘膜、蹄部及乳房皮肤发

3、生水疱和溃烂。主要发生于猪，但近年来猪群中流行的0型缅甸株、A型均可以感染牛羊，所以对牛羊养殖威胁巨大。发病率最高100%,死亡率依继发感染、管理等不同在1%-20%不等。小反刍兽疫是由副粘病毒科、麻疹病毒属中的小反刍兽疫病毒所引起的小反刍兽的一种急性高度接触性传染病，以眼、鼻有浆性分泌物、溃疡和坏死性口炎、肺炎及腹泻为特征，山羊最易感，绵羊次之，牛可感染但不发病，猪呈亚临床感染。该病之前主要在西非、南亚、西亚流行，近年传入我国，并迅速传遍全国，危害巨大。发病率可达100%,严重暴发期致死率为100%o传染性脓疱又称口疮，是由痘病毒科副痘病毒属的传染性脓疱病毒

4、引起羊、牛等动物和人的一种急性接触性传染病，其特征是口、唇等处皮肤与粘膜形成丘疹、脓疱、溃疡和结成疣状厚痂。敏感羊群发病毒率最高可达90%,死亡率可达50%o羊痘是由痘病毒科病毒引起的绵羊或山羊的一种急性、热性、接触性传染病，以体表无毛或少毛处皮肤和黏膜发生痘疹为特征，绵羊、山羊易感。在体表、尾根部出现痘疹或脓疱易与口疮、口蹄疫等易混淆。羊只引种运输后易发，在新疫区发病率和死亡率均较高。蓝舌病是由呼肠病毒科、环状病毒性中的蓝舌病病毒引起反刍动物的一种严重传染病。以口腔、鼻腔和胃肠道黏膜发生溃疡性炎症变化为特征。主要通过吸血昆虫传播。主要侵害绵羊；牛易感，但以隐

5、性感染为主；山羊也可感染，但一般不表现出症状。反刍类动物感染蓝舌病的死亡率平均为30%,其中绵羊的发病死亡率高达80%0上述疫病羊均可感染，发病有的以牛为主，有的以羊为主，有的牛羊均可发生，危害巨大。由于都可引起水疱性病变，因此在临床中很容易混淆，不能及时确诊，导致疫情不断加重，不断扩散，给我省新兴的山羊养殖产业带来巨大的危害。由于没有系统的快速鉴别上述疫病的试剂盒或方法，因此本研究拟开展这方面的研究，并建立快速鉴别方法，并在实验室和临床开展应用和防控示范。对于及时发现、诊断和采取相应防控措施具有重要意义。二、建设目标和内容(-)研究内容(1)主要研究的内容①

6、上述五种疫病基因数据库检索、PCR、Realtime-PCR引物设计、快速诊断检测技术建立与反应条件研究。对已有技术进行评估和优化；对未有的技术，需重新建立快速灵敏的方法，以用于临床流行病学调查和解决生产实际问题。②同时鉴别检测五种疫病的PCR、Realtime-PCR方法的建立。主要从引物兼容性、产物长短分布、反应条件方面进行摸索、优化。③临床应用验证。通过对送检样品进行检测和对养殖场进行病病排查，验证所建立的方法，对所存的问题加以修正。组装试剂盒进行应用，开展流行病学调查。①示范应用。建立示范点，在养殖地区综合应用临床综合防控技术，建立综合防控示范养殖场。

7、②疫病防治技术培训。在规模化养殖场或大型会议上进行饲养员、防疫员的技术培训。（二）拟解决的关键问题项目主要建立多重PCR和荧光定量PCR的快速鉴别方法。引起水疱症状的病毒种类多，在不知道要检测的为何种病毒时，需要全面考虑。建立快速鉴别诊断技术需要同时进行处理多种核酸性质的病毒，增加了难度。但从整体上来说，可以分为2大类，即RNA和DNA（下图）□因此需要同时提取RNA和DNA,且要防止RNA酶和DNA酶的降解，既要兼顾RT,又要兼顾PCRo但应用现代分子生物学技术都比较容易解决。病毒口蹄疫病毒小反刍兽疫病毒羊痘病毒传染性脓疱病毒蓝舌病病毒分类小RNA病毒科畐U

8、粘病毒痘病毒科痘病毒环状病毒核酸性质单