体内研究il-2基因瘤苗抗肿瘤效应及安全性检测-硕士论文

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1、上海交通大学硕士研究生学位论文体内研究IL-2基因瘤苗抗肿瘤效应及安全性检测ThestudyaboutANTI-TUMOREFFECTANDSAFETYOFIL-2GENEVACCINEINVIVO研究生姓名：指导老师：学科（专业〉：外科学《普通外科学）培养单位：上海交通大学医学院附属瑞金医院攻读学位：硕士学位答辩时间：2008年5月目录目录2中文摘要4英文摘要6引言9第一部分蛋白质HDS在什么什么的作用121试验材料131.1细胞株131.2细胞培养131.3杂交试验131.4动物模型131.5免疫组化132试验方法142.1细胞培养142.2大肠癌基因瘤苗生物活

2、性的鉴定142.3瘤苗安全性的检测142.4体内实验检测基因瘤苗的抗肿瘤效应。153结果173」ELISA检测IL・2蛋白水平得表达173.2瘤苗细胞的安全性检测结果173.3体内实验研究瘤苗的抗肿瘤效应194讨论22第二咅盼Albrighther的作用251试验材料261.1细胞株261.2细胞培养261.3杂交试验261.4动物模型261.5免疫组化262试验方法262.1细胞培养272.2大肠癌基因瘤苗生物活性的鉴定272.3瘤苗安全性的检测272.4体内实验检测基因瘤苗的抗肿瘤效应。283结果303」ELISA检测IL-2蛋白水平得表达301.2瘤苗细胞的安

3、全性检测结果301.3体内实验研究瘤苗的抗肿瘤效应322讨论36结论39参考文献40综述41致谢46发表论文情况47中文摘要体内研究IL-2基因瘤苗抗肿瘤效应及其安全性检测摘要目的:木课题研究转导白细胞介素-2(IL-2)基因的人大肠癌细胞瘤苗的抗肿瘤效应及其安全性检测。方法：结肠癌细胞株COL0205采用脂质体法稳定转染IL-2基因,应用ELISA法检测瘤苗的IL-2的表达，筛选高表达IL-2基因的细胞克隆作为基因瘤苗。将已构造好的结肠癌裸鼠模型分为两组，采用瘤体内注射的方法，注射经60Gy60Co照射的瘤苗细胞(治疗组)和PBS缓冲液(对照组)，密切观察肿瘤生长

4、状况，五周后处死所有裸鼠，取出肿瘤，观察并称重，免疫组化法检测IL-2基因的表达。把已制备好的大肠癌基因瘤苗用60Co进行照射，将照射瘤苗细胞继续培养，用苔盼蓝染色法测定细胞的存活率，将照射的瘤苗细胞和未照射组的瘤苗进行荷瘤试验。结果：获得基因瘤苗最高表达为COL0205-H5量为139.13ng/1X107/24ho瘤体内注射瘤苗组的裸鼠肿瘤生长缓慢，较早达到平台期，而对照组的肿瘤生长迅速，差异有显著性。(t=2.7,p<0.05)治疗组肿块的重量也明显小于对照组(t=7・2,p<0.01)o移植瘤治疗组IL-2免疫组化结果显示阳性，而对照组为阴性,说明了瘤苗在移

5、植瘤体内存活并分泌IL-2o照射60Gy60Co瘤苗细胞培养在25天内全部死亡，荷瘤试验显示照射后的瘤苗未能成瘤，而未经照射组均已成瘤。结论:通过体内实验研究证实了IL-2基因转导结肠癌细胞制备的瘤苗具有一定的抗肿瘤效应，经60Gy60Co照射后能消除其致瘤性，为肿瘤的治疗提供/—定的实验基础。关键词:大肠癌，白细胞介素-2,基因瘤苗，移植瘤英文摘要ThestudyaboutANTI-TUMOREFFECTANDSAFETYOFIL-2GENEVACCINEINVIVOABSTRACTObjective:Toinvestigatetheanti-tumoreffec

6、tofIL-2genevaccineanddetectitssafety.Methods:EukaryoticexpressionvectorscontaininghumanIL~2genewasstablytransfectedintocolorectalcancercelllinecolo205bylipofectamine.TheclonesstablyoverexpressionIL-2genewereidentifiedbyELISAdetection,theclonesofhighlystablyoverexpressiongofII厂2wereobta

7、inedandusedforsubsequenttest・Theathymicnudemicecarryingthehumancoloncancerweresubdividedintotwogroups:treatmentgroupsandplacebogroups・ThecellclonescontainingIL-2genewereirradiatedbyb0Co(60Gy)andusedastreatmentgroup,thephosphate-bufferedsaline(PBS)administrationwasusedfortheplacebogro