基因工程(跨课程)综合性实验论文

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1、广东药学院基因工程（跨课程）综合性实验论文姓名班级生物技术学号指导教师摘要1前言21材料与方法41材料41.1重组蛋白质药物单元的实验材料41.2重组DNA药物单元的实验材料41.2方法42.1重组蛋口质药物单元41.2.2.1.1工程菌构建（已由老师完成）42.1.2工程菌表达筛选61•2.1•3制备IL18__1_］手菌目/ill种81.4GST工程菌生长曲线分析81.2.1.5GST工程菌表达影响因素试验（诱导时机的影响）81.2.1.6表达进程分析91.7凝胶扫描分析91.2.1.8发酵工艺（观摩）91.1.9表达

2、产物分离纯化（由老师示教）92.2重组DNA药物单元92.2.1TCR工程菌构建（示教）92.2.2质粒TCRVal2.2-Vp7.1-EYFP的大规模制备92.2.2TCR质粒-脂质体复合物制备与分析102.4TCR体外转染活性检测111.2.5TCR转染体内试验122结果与讨论122.1重组蛋白质单元结果与讨论121.1IL-18工程菌表达筛选SDS-PAGE121.2GST工程菌生长曲线分析131.3表达影响因素试验131.4表达进程试验142.2重组DNA药物单元结果与讨论151.3.2.1质粒阴离子交换层析纯化1

3、52.2质粒柱层析样品琼脂糖电泳分析162.3质粒-脂质体复合物制备162.4TCR转染基因表达荧光检测172.5TCR体外转染活性检测182.2.6TCR转染体内试验183小结18致谢18摘要本综合性实验分为“重组蛋白质类药物”和“重组DNA类药物”二个单元。重组蛋白质药物以hIL-18的大肠杆菌表达系统为例，全面介绍工程菌构建、表达筛选、甘油种制备、生长与表达分析、发酵工艺单元操作和表达产物分离纯化等基因工程药物研发与生产实践屮最常用的技术与工艺过程。“重组DNA药物”单元以质粒TCRVal2.2-Vp7.1-EYFP

4、为例，介绍质粒DTA大规模制备、阳离子脂质体与质粒DNA复合物制备、T细胞体外转染、转染T细胞目的基因表达和体外活性检测、体内给药试验等。关键词重组蛋白药物；hIL・18;重组DMA药物；阳离子脂质体与质粒DNA复合物AbtractThecomprehensiveexperimentsarcdividedintotwounits,whichisnRecombinantProteinDrugs"and”RecombinantDNADrugs11.Theunit,Recombinantproteindrugs,takesexa

5、mpleforhlL-18inE.coliexpressionsystem.ltcomprehensivelyintroductedthemostusualtechnologyandprocessofR&Dandproductionpracticeofthegeneticengineeringdrugs、suchastheconstructionofengineeringbacteria,expressionscreening,glycerolkindofpreparation,growthandExpressionAna

6、lysis,fermentationprocessunitoperationandthepurificationofexpressionproduct.Theunitof"RecombinantDNAdrug1*takedplasmidTCRVal2.2-Vp7.1-EYFPasexample.ltintroductedthelarge-scalepreparationofplasmidDNA,Preparationofcationicliposomes-plasmidDNAcomplex,invitroTransfect

7、ionofTcells,expressionandinvitroactivityassayingofthetargetgeneoftransfectedTcellsandundertakingthetestinvivo.KeywordsRecombinantProteindrugs;hIL-18;RecombinantDNAdrugs;cationicliposomcs-plasmidDNAcomplex刖g生命科学与生物技术的最主要任务之一是利用其理论与技术研究成果为人类的健康服务，生物技术制药则是其最主要的应用领域，且

8、在重大传染性疾病、恶性肿瘤及其它疑难杂症防治方血具有巨大的潜力。药品的研究开发是一项庞大的系统工程，实验室研究发现的任何候选药物要开发成新药都需要经过生产工艺和质量控制研究、有效性评价和安全性评价等过程。需要特别指出的是，生产工艺和质暈控制研究的内容和任务还会始终贯穿于产品投产上市的过程中，相应的技术手