发酵分析实验讲义

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1、实验一原料中粗淀粉的测定(兰・爱农法)粮食是含淀粉量较多的原料，一般采用酸水解法测定。由于此法不仅能水解多糖类，而且也能把半纤维，多缩戊糖，果胶质等水解为葡萄糖和戊糖，所以测定结果为淀粉含量。一、实验目的1、掌握兰•爱农法测定还原糖的基本原理及方法2、训练学生在热源上进行滴定操作二、实验原理1、淀粉水解(C6Hio05)n+nH20►11C6H12O6淀粉葡萄糖2、斐林试剂①、2NaOH+CuSO4=Cu(OH)2l+Na2SO4+2XJ/HoucaKHHNoooooHHoCICICICO2H2+UcaK-/NoooooHHoCICICIC3、貳化还原

2、反应、CHO(CHOH)4CH2OH+6(COOKbHO、CHO/0NaCu+6H2O-COOHCOOKLhoh(CHOH)3+6+3C1J2OI+H2COCHOHch2oh600Na4、滴定终点(ch3)2n氧化型次甲基兰（兰色）CHOI(CH0H)4(ch3)2n还原型（无色）N（CH3）2+HCLCH2OHCOOHI(CH0H)4+ICH2OH葡萄糖酸三、仪器、试剂1、5%盐酸溶液2、20%氧氧化钠溶液3、斐林甲液：称取69.278g硫酸铜（CuSO4.5H2O）,加出0溶解并稀释至1000毫升过滤，储存棕色瓶中。4、斐林乙液：称取346g酒

3、石酸钾钠和lOOgNaOH,加水溶解并稀释至1000毫升。5、1%次甲基兰溶液：称取lg次甲基兰，加100mL水，贮存于棕色瓶中。6、04%标准葡萄糖溶液：准确称取4g无水葡萄糖（预先于100-105°C烘干），用水溶解，加5毫升浓盐酸，用水定容到1000毫升。配制时注意：盐酸36%,葡萄糖含一个结晶水，费林甲液一定过滤四、步骤1、试样水解精确称取样品l・5g（用10“天平，称样原则：样液与标液浓度接近）,置入500毫升锥形瓶屮，加5%盐酸溶液100毫升，安上回液冷凝管。在电炉上加热至沸腾，保持15分钟，取下迅速冷却，加入20%氢氧化钠溶液中和至pH6

4、.5・7,将溶液过滤于250毫升容量瓶中，再将锥形瓶内的残渣用蒸缰水冲洗2・3次，过滤、定容、滤液为供检糖液。2、斐林试剂的标定准确吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置于250毫升锥形瓶屮，加20毫升水，并从滴定管中加入13毫升0.4%标准葡萄糖溶液，摇匀,于电炉上加热至沸腾(两分钟内沸腾)，并保持微沸两分钟，加2滴1%次甲基兰溶液，继续用0.4%标准葡萄糖溶液以每二秒一滴的速度滴定至兰色消失，此滴定需在1分钟内完成，总耗量为V0毫升，平行操作3次，F=CV0甲液必须取准。取甲、乙液分别用两只移液管，若生成Cu(OH)2沉淀，用HC1洗(专用移液管，用后放

5、回原瓶)先滴定，一次性加入13mL,留ImL左右后滴定，后滴定是用碱式滴定管一滴一滴滴加的，注意一次性读总数。注意终点观察，蓝色消失，瓶内红色C11O2J,滴定速度一定要均匀、慢，不耍滴定过量，碱式滴定管尖端小管内注意不能产生气泡。3、样品溶液预测吸取斐林试剂甲、乙液各5毫升，置于250毫升锥形瓶中，加20毫升水，加热使其在2分钟内沸腾，保持2分钟，加2滴次甲基兰溶液，趁热以先快后慢的速度从滴定管屮滴加样液，待溶液兰色变浅时,以每2秒一滴的速度滴加样液，直至蓝色刚好褪去为终点。记录消耗样品的总体积W，平行操作3次。4、样站溶液的测定吸取斐林试剂甲、乙液

6、各5毫升，置于250毫升锥形瓶中，加20毫升水，从滴定管中加入(V1-1)毫升样品溶液，加热使其在2分钟内沸腾，保持2分钟，加2滴次甲基兰溶液，趁热以每2秒一滴的速度滴加样液，直至兰色消失为终点。总沸腾时间3分钟，记录消耗样品的总体积V,平行操作3次。同2,用样液取代标准溶液五、结果计算FX0.9粗淀粉(%)=X100mXV/250X1000式中：F—10毫升斐林试剂相当于标准葡萄糖的质量，mgm—样品质量，gv—测定时平均消失样品溶液的体积，mL0.9—葡萄糖换算成淀粉的系数通过比较Vo/V进行计算。此计算为用标准葡萄糖样作对照分析。实验二乳粉中总糖

7、的测定（蔥酮法）一、实验目的1、掌握蔥酮比色法测总糖的原理及方法2、熟悉和掌握722分光光度计的使用3、学习标准曲线的绘制二、实验原理单糖类遇浓硫酸时，脱水生成糠醛衍生物，后者可与恿酮缩合成蓝绿色的化合物，当糖的量在20-200mg范围内吋.其呈色强度与溶液中糖的含量成正比，故可比色分析（以葡萄糖为例）<1)CHOI4ICH3OHH2SO4脱水矩甲基咲喃醛糖恵酮OH•O恿酚蓝绿色化合物+h2o三、仪器试剂©10—LOOppm葡萄糖系列标准溶液：称取l.OOOOg葡萄糖，用水定容到LOOOmI,从中吸取L、2、4、6、8、10ml分别移入1O

8、OmL容量瓶中，用水定容，即得10、20、40、60、80、lOOppm葡萄糖系列标准溶液。②