ms培养基配方

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1、实验八MS培养基的配制和灭菌一、实验目的：了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程和分装方法。二、实验材料：天平、牛角匙、量筒、烧杯、搅拌机、胶桶、组培瓶、6种母液、白沙糖、活性炭、卡拉胶。三、方法步骤1、母液配制大量元素(母液I)mg/L100ml。(2)微量元素(母液II)(3)铁盐(母液III)(4)有机成分(母液IV)IVA和IVB(5)植物生长调节物质(2,4-D,NAA)以上各种营养成分的用量，除了母液I为10倍浓缩液外，其余的均为1()()倍浓缩液。其中，母液I、母液II及母液IV的配制方法是：每种母液中的几种成分称量完毕后，分别用少量的蒸帼水彻

2、底溶解，然后再将它们混溶，最后定容到1L。母液III的配制方法是：将称好的FeSO4・7H2O和Na2・EDTA・2H2O分别放到450mL蒸帼水中，边加热边不断搅拌使它们溶解，然后将两种溶液混合，并将pH调至5.5,最后定容到1L,保存在棕色玻璃瓶中。各种母液配完后，分别用玻璃瓶贮存，并且贴上标签，注明母液号、配制倍数、F!期等，保存在冰箱的冷藏室中。MS培养基中还需要加入2,4■二氯苯氧乙酸(2,4・D)、蔡乙酸(NAA)、6节基瞟吩(6BA)等植物生长调节物质，并且分别配成母液(0.1mg/mL)。其配制方法是：分别称取这3种物质各10mg,将2,4・D和

3、NAA用少量(1mL)无水乙醇预溶，将6BA用少量(1mL)的物质的量浓度为0.1mol/L的NaOH溶液溶解，溶解过程需要水浴加热，最后分别定容至100mL,即得质量浓度为0.1mg/mL的母液。2、培养基配制(1)配制培养液用量筒从各种母液中分别取出所需的用量：母液I为100ml,母液II、III、IVA和IVB各lOmlo再取2,4-D10ml.NAA2ml,与各种母液一起放入烧杯中。(2)称取54g卡拉胶;300g蔗糖;活性炭lg。(3)在胶桶中加入规定量的各种母液，包括生长调节物质。(4)加水定容至1升，开搅拌机，搅匀混合液。定容至10升，搅匀。（5）

4、向母液混合物加入白沙糖，继续搅拌；然后停一下搅拌机再加卡拉胶，开搅拌机混匀；接着再停搅拌机加活性炭，开搅拌机搅匀。（6）调pH用滴管吸取物质的量浓度为1mol/L的NaOH溶液，逐滴滴入溶化的培养基中,边滴边搅拌，并随吋用精密的pH试纸（5.4〜7.0）测培养基的pH,—直到培养基的pH为5.8为止（培养基的pH必须严格控制在5.8）（7）将培养基分装到所选用的培养容器屮，约30ml/瓶。（8）盖住瓶口（9）灭菌。待需要灭菌的物品码放完毕，盖上锅盖。在98kPa.121.3°C下，灭菌20min。灭菌后取出锥形瓶，让其中的培养基自然冷却凝固。最好放置Id后再使用

5、。四、分析1.MS母液分得更加细，一般实验室只分大量元素、微量元素、铁盐、有机成分四大类。这里将大量元素屮钙离子与硫酸根离子分开配，避免产生不溶物，将硼酸也单独列出来。另外，培养基中各营养物质Z间的浓度配比也直接影响微生物的生长繁殖和（或）代谢产物的形成和积累。2.在配制培养基吋应尽量利用廉价H易于获得的原料作为培养基成分。例如能用卡拉胶就不用琼脂。3.用搅拌机比较方便。但要人工不好，分配溶液缺乏量化。4.加入活性炭可使培养基变黑，有利丁•离体生根，还可以降低分泌物的毒害作用。附：MS培养基配方:成分分子量使用浓度（mg/L）人量元索（母液I）硝酸钾101.11

6、1900硝酸鞍80.041650磷酸二氢钾136.09170硫酸镁246.47370氯化钙147.02440微量元素（母液II）碘化钾166.010.83硼酸61.836.2硫酸镒223.0122.3硫酸锌287.548.6钳酸钠241.950.25硫酸铜249.680.025氯化钻237.930.025铁盐(Will)乙二胺四乙酸二钠372.2537.3硫酸亚铁278.0327.8有机成分（母液IV）肌醇100甘氨酸2盐酸硫胺素VB10.1盐酸毗哆醇VB60.5烟酸VB5或VPP0.5蔗糖342.3130g/L琼脂7g/L