046—余鸿毅—氨基酸的薄层层析—制药工程—第2实验室

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1、南方医科女修生物化学实验报告姓名：余鸿毅学a.3120206046专业年级：2012级制药工程（中药）组另IJ=第2实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称(TitleofExperimetn)氨基酸的薄层层析实验日期(DateofExperiment)2013/12/25实验地点(LabNo.)第2实验室合作者(Partner)黄浩集指导老师(Instructor)尹虹总分(Tota1Score)教师签名(Signature)批改日期(Date)实验原理:薄层层析是是色谱分析技术的一种。将固体吸附剂涂布在平板上形成薄层作为固定相。当液相（展展开溶剂）在固定相上流动时，由于吸

2、附剂对不同氨基酸的吸附力不一样，不同氨基酸在展开溶剂中的溶解度不一样，点在薄板上的不同氨基酸随着展开剂的移动速率也不同，因而可以彼此分开。（即通过吸附•解吸•再吸附•再解吸的反复进行，而将样品各组分分离开来）。本实验应用硅胶作为固相支持物，用竣甲基纤维素钠作为粘合剂，以正丁酸、冰醋酸及水的混合液为展开剂，测定混合氨基酸中各分离斑点的Rf值（物质迁移的距离与溶液前沿的距离比。）因为物质在某溶剂中的分配系数是一定的，故Rf值恒定，因此可以根据Rf值来鉴定被分离的物质。葩三酮水化后生成水化葩三酮，它与氨基酸发生竣基反应生成还原葩三酮、氨基醛，与此同时，还原菊三酮又与氨基葩三酮缩合生成紫红

3、色化合物而使斑点氨基酸显色。实验材料：实验样品：混合氨基酸溶液主要试剂：吸附剂：硅胶粘合剂：0.5%的竣甲基纤维素钠氨基酸的标准溶液：丙氨酸、甘氨酸、精氨酸展开•显色剂：正丁醇、乙酸、葩三酮溶液主要仪器与器材：层析板、尺子、铅笔、烧杯、药匙、量筒、毛细管、层析缸、烘箱实验流程：制板：调浆、涂布、干燥、活化一点样一一层析-显色实验步骤A、制板：调浆：取3g硅胶，加0.5%的竣甲基纤维素钠8ml,调成均匀的糊状涂布：取干燥洁净玻璃板均匀涂层干燥：将玻璃板水平放置，室温放置30min活化：70°C烘干30min内B、点样：标记：用铅笔距底边2cm水平线上均匀确定4个点，每个样品相距约1c

4、m。点样：用毛细管分别吸取丙氨酸、精氨酸、甘氨酸及混合氨基酸溶液，轻轻接触薄层表面点样。加样后原点扩散直径不超过2mm。点样后用嘴巴轻轻吹干，重复加样。C、层析：将层析板点样端浸入展层■显色剂，展层■显色剂液面应低于点样线。盖好层析缸盖，上行展层。当层析剂前沿在薄板一半时，停止展层，取出薄板，用铅笔描出溶剂前沿界线。D、显色：在烘箱中烘干，即可显出各层斑点。注意事项：1、薄层层析用的吸附剂如氧化铝和硅胶的颗粒大小一般以通过200目左右筛孔为宜。2、点样的次数依照样品溶液的浓度而定，一般不二次点样。3、整个过程屮，避免.用手接触层析板，必要时戴手套。A、主要实验条件：A、玻璃板要洁净

5、干燥，层析过程中，避免用手接触层析板；B、活化温度不宜过高，避免玻璃板爆裂；C、点样端不能没过展开•显色剂；D、薄层板要在密闭的层析缸中进行展层，防止层析液挥发；E、加样后原点扩散直径不超过2mm,重复点样时必须等第一点样品干后再点第二点，样品量不能过少。操作技巧及失误：1、点样时不要点太多样品，容易造成拖尾现象。失误：点样时点多了，有拖尾现象。实验现象：将点样后的玻璃板放进层析缸后，展开溶剂在固体相中往上流动：取出薄板后，画完前沿界线后，在烘箱烘干过程中，薄板逐渐呈现紫红色深浅度不一样斑点。实验数据:样品斑点-原点溶剂前沿-原点Ala2.32cm5.8cmGly1.70cm5.8

6、cmArg0.87cm5.8cm混合点10.85cm5.8cm混合点21・45cm5.8cm混合点31.98cm5.8cm实验结果：混合氨基酸一共含有3种氨基酸。各斑点Rf值氨基酸名称Ala0.400Gly0.293Arg0.150混合点10.147混合点20.250混合点30.3411、结果与讨论：1、硅胶的吸附力与含水量的问题答：在一定温度下，含水量越少，硅胶活性越高，吸附能力越强。2、由于点样操作不慎，实验结果中出现了拖尾。